תפוסה של אתר N-גליקוזילציה היא תכונה פיזיולוגית של גליקופרוטאינים ומייצרת בעיקר N-גליקן. שירות אנליזת תפוסה של אתר N-גליקוזילציה של Yaohai Bio-Pharma מתבצע באמצעות חיתוך, שחרור, עשיר והערכה באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית-יונת חשמל מסה/מסה (LC-ESI-MS/MS).
נמצאנו מעורבים באנליזה המבנית של חלבונים של מולקולות גדולות שונות, כולל חיסונים רקורסנטיים תת-יחידתיים, ננובדיות/VHHs/antibodies חד-תחום (sdAbs), שברים של חלבונים, הורמונים/פפטידים, ציטוקינים, גורמי גידול (GF), אנזימים, קולג'נים, וכו'.
דרישות רגולטוריות לתפוסה של אתר N-גליקוזילציה
לפי הוראות ICH Q6B, "עבור גליקופרוטאינים, נקבע התכולה של קרבונדרים (סוכרים ניטרליים, אמינו סוכרים וחומצות סיאליות). כמו כן, מבנה שרשרת הקרבונדרים, תבנית האוליגוסכרידים (פרופילrofile antennary) והאתרים הגליקוזילטים של שרשרת הפוליפפטיד מanalzed עד הסט-AA האפשרי ביותר."
שיטה אנליטית
| ניתוח |
שיטות |
| תפוסת אתר N-גליקוזילציה |
LC-MS לאחר דג'ליקוזילציה ותסיסה בפרוטאזות |
הפרוצדורות
1. תסיסה של חלבונים ליצירת שברים קטנים של פפטידים.
2. שחרור N-גליקנים באמצעות endoglycosidase H או PNGase F. Endoglycosidase H חותך את הקשר בין שני השארים של GlcNAc בלב המרכז של glycan קשור N-, בעוד ש-PNGase F הוא גליקואמידאז שחותך את הקשר בין GlcNAc ל-Asn, משחרר את כל שרשרת הסוכר וממיר את Asn ל-Asp עם עלייה במסה של 1-דא.
3. עשירון N-גליקופפטידים באמצעות HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography)
4. ניתוח של תפוס אתר glycosylation קשור N- באמצעות LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
