תפוסת אתר N-glycosylation היא תכונה פיזיולוגית של גליקופרוטאין ומייצרת בעיקר N-glycan. שירות ניתוח תפוסת אתר N-glycosylation של Yaohai Bio-Pharma מתבצע באמצעות עיכול, שחרור, העשרה וניתוח באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית-אלקטרוספריי יינון מסה ספקטרומטריית מסה (LC-ESI-MS/MS).
היינו מעורבים באפיון מבני החלבון של מולקולות גדולות שונות, כולל חיסונים רקומביננטיים של תת-יחידות, ננוגודים/VHHs/נוגדנים דומיינים בודדים (sdAbs), שברי נוגדנים, הורמונים/פפטידים, ציטוקינים, גורמי גדילה (GF), אנזימים, קולגנים, וכו '
דרישות רגולטוריות לתפוסת אתר N-glycosylation
על פי הנחיית ICH Q6B, "עבור גליקופרוטאינים, תכולת הפחמימות (סוכרים ניטרליים, סוכרי אמינו וחומצות סיאליות) נקבעת. יתר על כן, המבנה של שרשראות הפחמימות, דפוס האוליגוסכרידים (פרופיל אנטנרי), ואתרי הגליקוזילציה של שרשרת הפוליפפטיד מנותחים במידה הטובה ביותר.
שיטה אנליטית
| אָנָלִיזָה |
שיטות |
| תפוסת אתר N-glycosylation |
LC-MS לאחר עיכול דגליקוזילאז ופרוטאז |
נהלים
1. עיכול חלבונים של חלבונים ליצירת שברי פפטידים קטנים.
2. שחרור N-glycan באמצעות endoglycosidase H או PNGase F. Endoglycosidase H מבקע את הקשר בין שני שיירי GlcNAc בליבת הגליקנים הקשורים ל-N, בעוד PNGase F הוא גליקואמידאז שמנתק את הקשר בין GlcNAc ו-Asn, ומשחרר את כל שרשרת סוכר והמרת Asn לאספ עם עלייה במסה של 1-Da.
3. העשרת N-glycopeptide באמצעות HILIC (כרומטוגרפיה של נוזל אינטראקציה הידרופילי)
4. ניתוח תפוסת אתר גליקוזילציה N-linked באמצעות LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
לא
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
