ניתוח אתר N-Glycosylation הוא חיוני להבנת הפונקציות של גליקנים. Yaohai Bio-Pharma משתמש ב-Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS) לאחר ביקוע אנזימטי לאתר N-Glycosylation.
היינו מעורבים באפיון מבני החלבון של מולקולות גדולות שונות, כולל חיסונים רקומביננטיים של תת-יחידות, ננוגודים/VHHs/נוגדנים דומיינים בודדים (sdAbs), שברי נוגדנים, הורמונים/פפטידים, ציטוקינים, גורמי גדילה (GF), אנזימים, קולגנים, וכו '
דרישות רגולטוריות לאתר N-Glycosylation
על פי הנחיית ICH Q6B, "עבור גליקופרוטאינים, תכולת הפחמימות (סוכרים ניטרליים, סוכרי אמינו וחומצות סיאליות) נקבעת. יתר על כן, המבנה של שרשראות הפחמימות, דפוס האוליגוסכרידים (פרופיל אנטני) ואתרי הגליקוזילציה של שרשרת הפוליפפטיד מנותחים במידה הטובה ביותר.
שיטה אנליטית
אָנָלִיזָה |
שיטות |
אתר N-glycosylation |
כרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרומטריית מסה (LC-MS) לאחר מחשוף אנזימטי |
נהלים
1. עיכול אנזים של החלבון באמצעות טריפסין או פרוטאז אחר
2. הפרד מקטע גליקופפטידים
3. אשר את אתר ה-N-glycosylation באמצעות LC-MS
4. נתח נתונים