החשיבות של פיתוח תהליך עליון
תהליך עליון (USP), הידוע גם כתהליך התסיסה, הוא אחת משלבים הראשונים של הביופרוצסינג העליון. תהליך התסיסה המיקרוביאלית חשוב להכפלת תאים בצפיפות גבוהה ולביטוי גן חיצוני, מה שמשפיע ישירות על ייצור הביולוגיים והעלות שלהם.
בשלבים המוקדמים של פיתוח הביולוגיים (לפני קליני או שלב 1/2), המטרה היא לפתח תהליכים ללא חומרים ממקור בעלי חיים שניתן להרחיב עם תוצר בינוני ולקיים את כל התקנים איכותיים של המוצר.
בעוד שבשלבים המאוחרים (שלב 3 או מסחרי), נקonzentram על התוצר, אמינות, יכולת הרחבה והשכפוליות, תוך ייצור תהליך יעיל כלכלית. פעילויות העוסקות בעניינים אלו הן תיאור תהליך ובדיקות תקף תהליך. במקביל, כלי 'איכות על ידי תכנון' (QbD) ו'עיצוב ניסויים' (DoE) הם בדרך כלל בשימוש.
מילים מפתח: פיתוח תהליך, אופטימיזציה ותאימות, תהליך התסיסה, התסיסה של תאים מיקרוביאליים, התסיסה של חיידקים, התסיסה של שמרים, התסיסה בדENSITY גבוהה, התסיסה של זן מעוצב
יישום: תעשיית הביופארמה, רפואה לבני אדם, רפואה לבעלי חיים, חיסונים, ביולוגיים גדולים רקורסנטיים, ביולוגיים רקורסנטיים, חומר ביולוגי
פתרונות USP של Yaohai Bio-Pharma
תודות ליותר מ-10 שנים של נסיון בהתסיסה מיקרוביאלית, יש ל-Yaohai Bio-Pharma הידע לעזור לפתור את אתגרי תהליך ההתסיסה. אנו יכולים לבנות במהירות אסטרטגיות התסיסה בדENSITY גבוהה עבור Escherichia coli (E. coli) הפרשת פרלזמה, ביטוי פתיר תוך-תאי או גוף כלול, וביטוי חיצוני או תוך-תאי של שמרים.
שירותי הפיתוח הכלליים הזמינים לנו כוללים:
- עיצוב תהליך התסיסה בקנה מידה קטן של 7 ליטריםemode בשיטת fed-batch
- תאימות תהליך בשלושה חטיפות במערכת התסיסה בגודל 7 ליטרים
- הגדלת תהליך בקנה מידה בינוני עד ל-30L/70L
נוכל לבצע אופטימיזציה רב-פרמטרית באופן גמיש כדי להגשים את היבול או התכונה המבוקשת, באמצעות One-Time-A-Factor (OTAF) או Design-of-experiments (DoE).
פרמטרים עיקריים של התסיסה מפורטים כדלקמן:
תרכובות תסיסת חמצוץ ללא יונקים
ללא אנטיביוטיקה או לא, נפח זרע
טמפרטורת צמיחה, pH, רמת חמצן דיסולב (DO)
מצב אספקה (לדוגמה, fed-batch)
עוצמת המזרק (לדוגמה, IPTG, מתנול), נקודת מזרז (משקל לח של התאים/OD600),
טמפרטורת מזרז, זמן מזרז
וכו'.
פרטי שירות
| שירותים |
תהליך זרימה |
| גידולצמיחה בכוס מזג (500 מ"ל) |
הכנה של תכשיר ללא חומרי חיה → צמיחה של זרע מיקרובי → צמיחה במזגן → אינדוקציה → קציר |
| צמיחה בפרמנטר (7 ליטרים) |
הכנה של תכשיר ללא חומרי חיה → צמיחה של זרע מיקרובי → פרמנציה צפופה של תאים בביורקטור 7 ליטרים → אינדוקציה → קציר |
| בקרת איכות של חלבונים/פפטידים |
טיפול מקדים: ביטוי פתיר תוך-תאי: קציר ומחזור תאים מיקרובי → שבירת תאים באולטרה-סאונד → הסרת שרידים תאיים → המרק הגס. ביטוי גוף כלול: קציר ומחזור תאים מיקרובי → שבירת תאים באולטרה-סאונד → הכנת גוף כלול → המרק הגס. ביטוי פתיר חוץ-תאי: איסוף תרפלט התרבות → ריכוז והחלפת תכשיר → המרק הגס. ניתוח איכות: המרק הגס כדגימה → ניתוח חלבון מטרה על ידי SDS PAGE או בלווטינג מערבי (WB) |
| בקרת איכות של פלסמידים |
טיפול'utilisation וניתוח איכותתאובָּה תַּכְסִיס פלסמיד → ניתוח DNA על ידי אלקטר'use gel אגרוזיLECTROPHORESIS |
מחקר מקרה
אנו מוסמכים על ידי הלקוח שלנו להגדיל את התוצרת הרצויה של הורמון הפוליפפטיד מ-8 g/L ל-10 g/L.
בהתבסס על העיצוב המילולי מלא והעיצוב שטחי התגובה בדפי DoE, זיהינו במהירות ואופטימזנו את הפרמטרים המפתח של התהליך התסיסה. תחת התהליך האופטימלי של תסיסה צפופה של תאים, רמת הביטוי עלה ל-10 g/L.
הประสบויות שלנו
- עבדנו על מגוון רחב של מארחים מיקרוביולוגיים, למשל Coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink סטראין 1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) ו Hansenula polymorpha (H. polymorpha) .
- יש לנו ניסיון עם E. coli סיקрטיון פריפלסמית, ביטוי פתיר וביטוי גוף חיבור, וכן ביטוי תוך תאי או חוץ תאי של שמרים. תקופת התוצר של גוף החיבור מגיעה עד 10g/L, בעוד שהתקופה של חלבונים פתירים נע בין 0.5 ל-15g/L.
- נמצאנו מעורבים לפתח ויצרנו מולקולות גדולות רבות, כולל חיסונים רקורסנטיים תת-יחידתיים, חלקיקים דומים לווירוס (VLPs), הורמונים (אינסולין, GLP-1, הורמון צמיחה), ציטוקינים (אינטררלווקין-2/IL-2, IL-15, IL-21), גורמי צמיחה (EGF, FGF, NGF), ננובדיז/ חסמים חד-דומייניים (sdAbs), אנזימים וכו'.
- ציוד
מערכת תסיסה של 7L*16
מגלה ביולוגי Cedex, מגלח תהליך ביולוגי
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
