החשיבות של פיתוח תהליך שלב התחתון (DSP)
הסם התמצתי השלם מכיל את חלבון המטרה או הדנ"א הפלזמידי, וכן צמחים קשורים לתוצרת ולתהליך, כמו אגרגטים, תרכובות תאיות מיקרוביאליות, חלבונים תאיים (HCP), דנ"א תאי (HCD), אנדוטוקסין ואנטיביוטיקה.
לכן, זה קריטי לעצב תהליך DSP יעיל, תהליך טיהור שיסיר צמחים מסוימים וייצר תרופה מופרשת באיכות גבוהה. בנוסף, אופטימיזציה של תהליך הטיהור יכולה לעזור להגדיל את חזרת המוצר, להפחית עלויות, לשפר את גמישות התהליך ואת יכולתו להיקלט.
מילים מפתח: פיתוח תהליך, אופטימיזציה ותאימות, תהליך טיהור, כרומטוגרפיה, הסרת חומרים זרים, הסרת HCP, הסרת HCD, הסרת אנדוטוקסינים, דנתרציה של חלבונים והחזרה לצורה המקורית, אסמבלי של VLP, צירוף
יישום: תעשיית הביופארמה, רפואה לבני אדם, רפואה לבעלי חיים, חיסונים, ביולוגיים גדולים רקורסנטיים, ביולוגיים רקורסנטיים, חומר ביולוגי
פתרונות DSP של Yaohai Bio-Pharma
יש לנו נסיון רב בפרידת חלבונים מטרתיים או פלזמידים ממאטריצות מורכבות באמצעות פיתוח ואופטימיזציה של תהליך טיהור בהמשך. ישנן סוגים שונים של פעולות יחידה מתאימות לטיהור של ביולוגיים, כולל סנטריפוגה, פילטרציה, הומוגניזציה, קריסת בסיס, אולטרה-פילטרציה, שיקוע, דנתרציה של חלבונים והחזרה לצורה המקורית, כרומטוגרפיה וכו'.
שירותי פיתוח הטיהור הזמינים לנו כוללים:
- פיתוח התהליך המלא של הטיהור מהאיסוף של התאים או המحلول עד לרכיב פעיל הסופי.
- השגת תהליך טיהור מופתל על סמך טינופים הקשורים למשהו ולתהליך כדי להעלות את איכות המוצר והבטחון שלו, למשל, HCP, HCD, אנדוטוקסין.
- הגדרה והשגת תכונות מפתח באחת או יותר פעולות יחידה, כולל פיצול תאים, סינון זרימה משולבת, בדיקת רזין, כרומטוגרפיה, דניטורציה של חלבונים ותחייה, וכו'.
- השגת תהליך בהיבטים של איכות, תוצר, חזרה, עלות וקטיעתית.
- אימות של תהליך הטיהור הלא-ספציפי.
- הערכה מבוססת סיכון של טווח פרמטרים ועיצוב ניסויים (DoE) בתכנון תהליך.
פרטי שירות
פלטפורמות טיהור חלבונים או פלזמיד סטנדרטיות מבוססות על מספר שלבים ראשוניים של טיהור גס ופחות מארבע שלבים של כרומטוגרפיה, כולל תפיסה, טיהור ביניים, וטיהור סופי.
| פרטי שירות |
פעולות יחידה |
פרמטרים |
| טיהור גס |
סנטריפוגה |
מהירות סיבוב, זמן |
| הומוגניזציה בלחץ גבוה |
אחוז החומר התверד, לחץ, מחזורים |
| ליזיס אלקלינית מתמשכת |
היחס בין תאים שנחזרו ל محل הליזה, זמן ליזה |
| סינון זרימה משולבת |
חומר המàng וגודל הפתחים, קצב זרימת המאכל, לחץ חילוף ממברנה (TMP), יחס נפח הפילטר למישור הממברנה |
| השחתה |
סוג והעומס של המהשך, חומר משלים, pH, טמפרטורה, זמן |
| דינטורציה ופרפורמציה |
מסולבילייזציה של חלבונים בגופי ההכלה |
ריכוז ד-naTurant (לדוגמה, יורה, Guanidine HCl, שומן יוני חזק), שומנים (לדוגמה, סולפאת דודציל נתרן, SDS), תכשירי הפחתה (לדוגמה, Dithiothreitol, DTT), תכשירי חיתוך (Ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA), טמפרטורה, זמן |
| פרוטאינים מחזירים לצורתם המקורית |
שיטות מחזירה (המעטה, דיאליזה או SEC מחזירה), ריכוזי פרוטאין, בופרים, pH, טמפרטורה, זמן, תכשירי חמצון והפחתה (לדוגמה, Glutathione, GSH/ Glutathione חמצני, GSSH, DTT/GSSH, Cysteine/Cystine), תוספי מולקולות קטנות (L-arginine, יורה, Guanidine/HCl, ושומנים) |
| תפיסת, טיהור מדרגה ובידוד סופי |
AC (כרומטוגרפיה של אפיניטי) |
סוגים שונים של כדור/עמוד כרומטוגרפיה (לדוגמה, AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), אורך וקוטר העמוד, הרכב הבופר, נפח הזריקה, הרכב המבנה (הסיבה וההפרדה), pH, קצב זרימה, תנאים של חיבור, חיטוי והפרשה. |
| IEX (כרומטוגרפיה של החלפת יונים - אניון או קטיון) |
| HIC (כרומטוגרפיה של התאמה חלבונית) |
| הפרדת מלחים ו/או כרומטוגרפיה של חילוק לפי גודל (SEC) |
| RPC (כרומטוגרפיה בフェזה הפוכה) |
| MMC, כרומטוגרפיה בתמיסה מעורבת |
מחקר מקרה
מקרה 1
נשכרנו לפתח ולעדכן את תהליך הטיהור של הזרם התחתון כדי להעלות את טהרת הפרוטאין מ-85% ל-90% תוך ירידה במספר שלבים של כרומטוגרפיה.
יאוהאי סיפק תהליך טיהור אמין וניתן להיקלט עם שלושת שלבי כרומטוגרפיה לפרוטאין המטרה, אלרגן חי, והטהרה הסופית הגיעה ל-95%.
מקרה 2
יאוהאי נבחר על ידי הלקוח שלנו לעדכון תהליך הסרת האנדוטוקסין של חיסון חלקיק דומה לנגיף (VLP).
הצוות שלנו ערך עדכון של פרמטרי הכרומטוגרפיה והכין תכשיר עם טהרה של 98% ושאריות אנדוטוקסין של 12.8EU/מג.
הประสบויות שלנו
- נמצאנו מעורבים בפיתוח והכנת מגוון של מולקולות גדולות, כולל חיסונים תת-יחידה רקורסיביים, VLPs, הורמונים (אינסולין, GLP-1, הורמון צמיחה), סיטוקינים (אינטרnterleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), גורמי צמיחה (EGF, FGF, NGF), ננובדיז/אנטיבודיז יחיד-דומן (sdAbs), אנזימים, וכו'.
ציוד
אנו משתמשים במערכות AKTA Pure, AKTA Avant ו-HPLC הכרייתיות מובילות בתעשייה לביצוע שיטות כרומטוגרפיה שונות כולל כרומטוגרפיה באפיניטי, החלפת יון, אינטראקציה הידרופובית, הפASE, וכרומטוגרפיה לפי השכבה.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
