Enzime cheie pentru producerea de RNA lung
mRNA, ca tip de RNA codant lung, a funcționat în mod sigur și eficient la un spectru mai larg de persoane în timpul pandemiei de COVID-19. Alte RNAs codante lungi, cum ar fi RNA autoamplificator (saRNA) și mRNA circulară (circRNA), au arătat, de asemenea, eficiență în studii precliniști și cliniști.
Producerea la scară largă a RNA-ului codant lung se bazează pe transcripția in vitro (IVT) prin câteva reacții enzymatice. Pașii de producere a RNA includ pregătirea DNA-ului șablon, sinteza RNA prin IVT, circulație, eliminarea DNA-ului, modificarea RNA (capare și adăugarea cozii) și purificarea RNA.
Există câteva enzime cheie folosite în producerea de RNA codant lung (de exemplu, mRNA, saRNA și circRNA), inclusiv endonucleazele de restricție, polimeraza T7 RNA (T7 RNAP), inhibitorul de RNasa, pirofosfataza inorganică, DNaza I, enzima de capare vaccinia și RNasa R.
|
Procesul
|
Enzim
|
Funcție
|
|
Pregătirea DNA-ului șablon
|
Endonuclease de restricţie
|
Liniarizarea ADN-ului plasmidic (pDNA) pentru a evita generarea unui transcript mai lung.
|
|
Sinteză RNA prin IVT
|
Polimeraza RNA T7 (T7 RNAP)
|
Se leagă de promotorul T7 și generează transcript RNA specific; Joacă un rol cheie în timpul reacției IVT.
|
|
Inhibitor al RNase, recombinant
|
Inhibă activitatea RNase în timpul reacției IVT.
|
|
Pirofosfatasa, inorganică (iPPase)
|
Previn pirofosfatul în timpul reacției IVT.
|
|
Eliminare DNA
|
DNase I
|
Eliminați șablonul DNA.
|
|
Modificare a RNA
|
Enzimă de capping Vaccinia
|
Adăugați structuri Cap1 la extremitățile 5′ ale mRNA-ului IVT.
|
|
2’-O-Metiltransferază
|
| îmbogățire circRNA |
Rnase R |
Digestarea RNA liniar și bogățirea RNA circular. |
Yaohai Bio-Pharma Ofere Soluție CDMO Completă pentru Enzime
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
