Sinteza in vitro a mRNA-ului
Componentele principale ale mRNA-ului sunt 5’-cap, 5’-UTR, cadru de citare deschis (ORF), 5’-UTR și coada poly A la 5’, care sunt esențiale pentru menținerea funcțiilor mRNA. Cercetătorii au folosit o varietate de metode pentru a identifica și optimiza secvențele și structurile mRNA.
Sintea mRNA-ului se realizează pe baza transcripției in vitro (IVT) folosind templete DNA liniare, polimeraze RNA (T3, T7 sau SP6), nucleotizi ne modificati sau modificati, enzyme și reagenti adecvati.
modificare 5’ Cap
Secvențele de mRNA madur din eukariocit prezintă o calotă de 7-metilguanosină (m7G) la capătul 5', care îmbunătățește stabilitatea mRNA și eficiența traducțională. Există două metode generale pentru capturarea mRNA in vitro. În primul rând, mRNA poate fi calotat împreună cu transcrierea in vitro prin adăugarea unui analog calotă de structura m7GpppG (de exemplu, CleanCap) în sistemul IVT. Această metodă de calotare co-transcripțională oferă o structură naturală de capsula 5' și crește eficiența calotării la aproape 90-99%. În al doilea rând, cartografierea mRNA poate fi realizată și prin reacțiile enzimatici de calotare după reacția de transcriere in vitro.
Modificare PolYA
Coada poly(A) extinde și perioada de jumătate a mRNA-ului in vivo și îmbunătățește eficiența traducerii mRNA. Lungimea cozii amplificate poly(A) ar trebui să fie între 100-300 deucleotide. În plus, adenosina modificată crește stabilitatea cozii poly A împotriva degradării de către RNase celulare. Coada poly A poate fi inserată prin transcripție in vitro folosind un șablon DNA care codifică poly A, ceea ce duce la o lungime specifică a cozii poly A. Polimeraza poly A recombinantă poate fi de asemenea folosită prin poliadenylarea enzymatică după transcripția mRNA.
Modificare Nucleotide
Nucleozidele modificate pot inhiba recunoașterea și/sau activarea receptorilor de recunoaștere a modelelor (PRR) și pot întări eficacitatea vaccinurilor mRNA în două modalități total diferite. Adăugarea unoror nucleozide modificate chimic, inclusiv pseudouriidina (ψ), 1-metilpseudouriidina (m1ψ), tiouriidina (s4U) și 5-metilcitozina (m5C), poate preveni activarea TLR7/8 și a altor receptori imuni innati, ceea ce reduce semnificativ imunogenicitatea mRNA.
sistem de Livrare mRNA
Pentru a menține funcția mRNA, aceasta trebuie să pătrundă în citoplasma gazdă și să exprime antigene specifice. Una dintre cele mai mari provocări cu care se confruntă vaccinurile și terapiile mRNA constă în livrarea mRNA în celulele țintă cu niveluri suficient de ridicate de traducere, ceea ce necesită sisteme de livrare a mRNA extrem de specifice și eficiente. S-au dezvoltat și folosit mai multe vectori de livrare a mRNA, inclusiv celule dendritice (DCs), protamina, polimere catiónice și liposome catiónice.
Complexele de lipide cationice cu mRNA și alte preparate pot forma colectiv nanoparticule de 80-200 nm denumite nanoparticule lipidice (LNPs). Ca unul dintre cele mai avansate sisteme de livrare a mRNA, LNP include lipide cationice ionizabile, fosfolipide naturale, colesterol și polie tilocol (PEG). Câteva vaccinuri RNA și terapii (siRNA și mRNA) aprobate de Administrația Americană de Produse Alimentare și Medicamente sunt bazate pe sisteme de livrare LNP.
Yaohai Bio-Pharma Oferește Soluție Completa pentru RNA
Livrabiluri Personalizate
|
Notă
|
Rezultate prezentabile
|
Specificitați
|
Aplicații
|
|
ne-GMP
|
Substanță Medicamentoză, mRNA
|
0,1~10 mg (mRNA)
|
Cercetare preclinică, cum ar fi transfecția celulelor, Dezvoltarea metodelor analitice, Studii de pre-stabilitate, Dezvoltarea formulațiilor
|
|
Produs Farmaceutic, LNP-mRNA
|
|
GMP, Sterilitate
|
Substanță Medicamentoză, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Medicament nou de investigație (IND), Autorizație de desfășurare a unui eseu clinic (CTA), Aprovisionare pentru probe clinice, Cerere de licență biologică (BLA), Aprovisionare comercială
|
|
Produs Farmaceutic, LNP-mRNA
|
5000 amfluoane sau siringe prefăcute / cartridge
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
