DNA plasmid, ca in vitro șablon de transcripție (IVT), este un material brut important pentru producerea de mRNA. Performanța ridicată, puritatea mare și recuperarea înaltă a DNA-ului plasmid sunt principalele obiectiv în timpul dezvoltării procesului plasmidic.
Yaohai Bio-Pharma oferă o soluție integrală pentru dezvoltarea plasmidului, inclusiv dezvoltarea proceselor upstream (fermentare) și downstream (purificare), caracterizarea procesului și validarea procesului. Avem o experiență extensivă în îmbunătățirea rendimentului plasmidului și izolarea acestuia din matrice complexe prin dezvoltarea și optimizarea proceselor de fermentare, purificare și eliminare a impurităților.
Procesul de bază bio-tehnic pentru producerea de plasmide include: Escherichia coli (E. coli) fermentare, colectarea celulelor și liza alkalina, clarificare, concentrație, proces în trei pași de cromatografie (capturare, purificare intermediară și polire), și concentrație.
Detalii ale Serviciului | Operațiuni Unitare | Parametrii |
E. coli de fermentare |
Sticlă de agitație | Compoziții de medii, antibiotice, volum inocul, temperatură de creștere și altele. |
Fermentor (7 L) |
Antibiotic, volum inocul, temperatură de creștere, pH, oxigen dissolvat (DO), modul de alimentare (de exemplu, fed-batch), medii de alimentare, timp de fermentare și altele. |
|
Culegere celule | Microfiltrare | Standard E. coli proces de culegere |
Lizare celulară | Resuspendare a celulelor, lizare alcalină, neutralizare | Raport de alcali, timp de lizare |
Clarificare | Filtrare | Filtrare rudimentară, cu filtre de 20 µm și 5 µm (preferat) |
Concentraţie | Ultrafiltrare, filtrare cu flux tangențial | Dimensiunea porilor (sau NMWC), presiune transmembranară (TMP), Flux, raportul volumului de filtrat la suprafața membranei |
Cromatografie în trei etape | Cromatografia prin excludere de mărime (SEC) sau cromatografia prin filtre gel (GFC) | Lungimea și diametrul coloniei, compoziția buffer-ului, volumul de injectie, compoziția fazei mobile (adsorpție și desorpție), pH, debit, condițiile de echilibrare, legare, spălare și eluare. |
Cromatografia prin afinitate (AF) | ||
Cromatografia prin schimb de ioni negativi (AEX) | ||
Concentraţie | Ultrafiltrare, filtrare cu flux tangențial | Dimensiunea porilor (sau NMWC), presiune transmembranară (TMP), Flux, raportul volumului de filtrat la suprafața membranei |
Mai multe soluții pentru procesul de purificare a biologice |