Referitor la pregătirea în lot a precursorilor RNA, o metodă frecvent utilizată este transcripția in vitro (IVT). Reacția IVT utilizează un ADN plasmid linearizat care conține promotorul T7 ca șablon și sintetizează un precursor RNA cu nucleoside trifosfat (NTP) ca substraț în prezența polimerazei RNA T7.
Metodele de ciclizare in vitro includ ligarea chimică, ligarea enzymatică și metoda permuted intron-exon (PIE). Ligarea chimică și enzymatică sunt potrivite pentru ciclizarea RNelor mai scurte. Când fragmentul este mai mare de 100 nt, rata de ciclizare va scădea semnificativ. În schimb, metoda bazată pe sistemul PIE poate realiza ciclizarea secvențelor de 8 kb.
Sub catalizația guanosin trifosfat (GTP), structura PIE subiectează ciclizării secvențelor extra-intron. Combinată cu o strategie rațională pentru a crește rata de ciclizare, Yaohai Bio-Pharma poate realiza ciclizarea secvențelor de până la 4 kb, cu o eficiență de ciclizare de peste 80%.
Reacția de ciclizare in vitro a RNA curge astfel:
Precursorul RNA este sintetizat prin trancripție in vitro, iar componenta PIE finalizează auto-splicing-ul sub catalizația GTP pentru a forma circRNA.
Detalii Servicii
| Procesul |
Detalii ale Serviciului |
Perioadă de livrare (zi de lucru) |
| Transcripție in vitro și circulație |
Confirmarea sistemului de reacție |
1-2 |
| Reacțiile de Transcripție In Vitro și Ciclizare |
| Digestie cu RNase R |
| Optimizarea reacției |
Compoziție Reacție, Optimizare Timp |
2-5 |
Caracteristicile noastre
- Proiectare Riguroasă a Testelor și Optimizare
Se poate obține ciclizare a RNA de până la 4 kb.
- Eficiență ridicată de ciclizare
Prin o strategie rațională de optimizare a secvenței, se poate atinge un rata de ciclizare de peste 80%.
Prin control riguros al RNaselor din mediul experimental și consumabile, degradarea RNA-ului este prevenită eficient.
Studiu de caz
Ciclizare și înrichire in vitro a circRNA
Pe baza sistemului PIE, Yaohai Bio-Pharma a optimizat secvența circRNA, cu o rată de ciclizare de peste 80% verificată prin electrofoze pe gel de agaroză (AGE). Folosind RNase R pentru a înrichi circRNA, rezultatele electrofozei E-gel arată că precursorul de RNA liniar este digerat, iar după purificare ulterioară, majoritatea circRNA cu tăieturi pot fi eliminate. Soluția de purificare este dezvoltată independent de Yaohai Bio-Pharma.
Circulație și înrichire in vitro a circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
