Conform dogmei centrale, RNA mesager (mRNA) este podul prin care se transmite materialul genetic de la ADN la proteine.
mRNA joacă un rol biologic prin codificarea proteinelor în vivo, iar mRNA matură din organismele eucariote constă din cinci componente: 5' Cap (structura capului), 5' UTR (regiune ne-codificatoare), ORF (cadru de citire deschis), 3' UTR și coada 3' polyA (coada poliadenuclatată).
Detalii Servicii
| Procesul |
Serviciu Opțional |
Detalii ale Serviciului |
Perioadă de livrare (Zi) |
| proiectare și optimizare a secvenței mRNA |
Proiectare și optimizare a secvențelor codante |
Alinierea secvenței CDS
Optimizarea codonilor secvenței CDS
|
1 |
| Proiectare și optimizare a secvențelor necodificatoare |
proiectare și optimizare a secvenței 5' UTR
proiectare și optimizare a secvenței 3' UTR
proiectare și optimizare a secvenței polyA
|
1-2 |
Opțiuni personalizabile
| 5' UTR/3' UTR |
- Secvență UTR naturală
- Secvență UTR mutantă/inginerită
|
| coada 3' PolyA |
- coada de 100A ~120A (recomandată)
- Coada polyA segmentată
- Alte personalizări
|
Strategii Comune pentru Proiectarea Secvenței mRNA
| componentele mRNA |
Funcții Biologice |
Strategii de Optimizare |
| cap 5’ |
Protejează mRNA împotriva degradării de către exonucleazele și acționează în concordanță cu coada polyA de la extremitatea 3', proteinul de legare al polyA și factorul de inițiere a traducerii pentru a iniția traducerea proteică. |
Structura naturală Cap1 evită receptorii de recunoaștere a modelului și astfel reduce răspunsul imun natural, care poate fi realizat prin cufărdenie co-transcripțională într-o singură etapă sau prin cufărdenie enzymatică în două etape [vedeți cufărdenie enzymatică a mRNA și cufărdenie co-transcripțională pentru detalii]. |
| uTR 5’ |
UTR 5' poate fi recunoscut de ribozome, reglementează traducerea mRNA și afectează stabilitatea mRNA. |
Conțin secvențe Kozak fără o structură secundară foarte stabilă. UTR-urile naturale ale genelor cu o exprimare puternică sunt preferate pentru transcrierea in vitro (IVT) a mRNP-urilor, cum ar fi α-globina și β-globina. |
| CDS |
Regiuni codante ale proteinelor și secvențe codante pentru antigeni, anticorpuri sau alte proteine functionale. |
Optimizarea codonului crește nivelul de traducere, notându-se că anumite codoni neoptimali pot juca un rol în încovoierile proteice. |
| 3' UTR |
Reglementează traducerea mRNP-ului și stabilitatea acestuia. |
UTR-urile naturale ale genelor cu o exprimare puternică sunt preferate pentru mRNP-urile IVT, cum ar fi α-globina și β-globina. |
| coada 3' polyA |
Reglementează expresia proteică și protejează structura capului de deteriorare. |
Este necesară o lungime adecvată (100-150 pb); codificarea cozii polyA pe plasmidul șablon al transcrierii asigură o lungime mai definită a cozii polyA. |
Caracteristicile noastre
- Selectare diversificată a sursei UTR
Surse multiple de biblioteci UTR naturale și modificate cu expresie intensă; strategie madură de modificare a UTR;
- Echipă de optimizare CDS la ultimul nivel
Colaborează cu o echipă de algoritmi AI profesioniști pentru a finaliza optimizarea codonilor.
- Distribuție egală a coadă polyA
Adaugă secvențe polyA în funcție de șabloanele DNA pentru a controla lungimea mRNA cu mai multă precizie.
- Combinări diverse de optimizare
Realizează o expresie eficientă a mRNA cu imunogenicitate redusă.
Studiu de caz
Proiectare a secvenței unei mRNA cu doi reporteri: mRNA mCherry-eGFP
Serviciul de mRNA al Yaohai Bio-Pharma se continuă să fie actualizat prin proiectarea și optimizarea unei secvențe tandem cu doi gene reporter, care realizează co-expresia celor două gene.
Folosind un reagent de transfecție convențional, secvența tandem a două gene mCherry-eGFP mRNA este transfecționată în celule 293T, și se detectează două semnale fluorescente de mCherry (rosu) și proteină fluorescentă verde îmbunătățită (eGFP) cu expresie simultană după 48 de ore, iar graficul stivat este evidențiat în galben.
Expresie a mRNA-ului mCherry-eGFP în celula 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
