În comparație cu plafonarea enzimatică în două etape, metoda de plafonare co-transcripțională într-un singur pas poate reduce semnificativ fluxul procesului. Metoda este orientată spre rezultate și implică adăugarea de analogi cap la reacția de transcripție in vitro (IVT). Analogii capac pot fi introduși la începutul transcripției și ARNm cu structură capac poate fi obținut la finalizarea transcripției. Analogii actuali de cap de a treia generație pot evita limitarea inversă și pot adăuga direct structura Cap 1 la produsul de transcripție.
Pentru a lua în considerare imunogenitatea ARNm in vivo și eficiența translației, procesul IVT adoptă adesea anumite tipuri de NTP modificate, iar nucleotidele modificate comune sunt pseudouridina (Ψ), N1-metil-pseudouri-dina (N1Ψ) și 5-metilcitozina (5mC) .
Figura: Diagrama reacției de co-transcripție și de limitare a ARNm
Detalii despre servicii
Service
|
Detalii despre servicii |
Perioada de livrare (zi lucrătoare) |
Limitarea co-transcripțională |
Răspuns transcripțional in vitro (analog Clean Cap) |
1-2 |
| Modificări ale nucleotidelor (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Îndepărtarea șablonului ADN (DNaza I) |
Optimizarea condiției IVT - opțional |
Proiectarea și optimizarea componentelor de reacție |
3-7 |
Caracteristicile noastre
- Strategii diversificate de modificare a nucleotidelor
Multiple strategii opționale de modificare a nucleotidelor pot îmbunătăți expresia proteinelor.
- Sistem de reacție optimizat
Obțineți un raport de transcripție ridicat și o eficiență ridicată a plafonării.
- Proces stabil de acoperire
Obțineți o rată de plafonare de peste 95%.
Preveniți degradarea ARNm în mod eficient prin controlul strict al RNazei în mediul experimental și consumabile.
Studiu de caz
Yaohai Bio-Pharma a construit o platformă matură de proces de limitare co-transcripțională, folosind analogi curați pentru a adăuga direct structura Cap1 evitând în același timp limitarea inversă. După pretratarea eșantionului standardizat și detectarea prin electroforeză capilară (CE), rata de limitare a ARNm a proteinei fluorescente verzi îmbunătățite (eGFP) poate atinge mai mult de 95%.
Eficiență de limitare a mRNA eGFP de peste 95%
ARNm eGFP și ARNm mCherry preparate prin acoperire co-transcripțională sunt transfectate în celule 293T, respectiv, și se observă un semnal fluorescent puternic după 48 de ore, sugerând că ARNm este exprimat eficient în celulele 293T.
Exprimarea ARNm eGFP și ARNm mCherry în celula 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NU
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
