Capatarea la capătul 5’ este o modificare esențială a ARNm. ARNm-urile cu structuri capac, în special structurile Cap1, facilitează ARNm-urile să evite răspunsurile imune înnăscute in vivo, rezultând o traducere eficientă a proteinelor.
Capsularea enzimatică (metoda în două etape) este metoda convențională de acoperire a mRNA, similară cu procesul de acoperire în organismele eucariote. Sub acțiunea unei serii de enzime, 7-metilguanina (m7G) este legată de capătul 5’ al ARNm printr-o legătură 5’-5’ trifosfat și suferă modificări de metilare pentru a forma structura capacului Cap 1 (m7GpppN).
Diagrama formării structurii naturale a capacului
Fluxul reacției de acoperire enzimatică este următorul:
ADN-ul plasmidic liniarizat este utilizat ca matriță pentru transcripția in vitro (IVT) în prezența polimerazei T7, iar ARNm cu o structură de capac 5’ se formează după o purificare într-o singură etapă folosind enzima de acoperire vaccinia și 2’-O. -metiltransferaza.
Detalii despre servicii
Service optional |
Detalii despre servicii |
Perioada de livrare (zi) |
acoperirea enzimatică a ARNm |
Reacție de închidere enzimatică |
1 |
Optimizarea reacției de plafonare - opțional |
Proiectarea și optimizarea componentelor de reacție |
3 ~ 7 |
Caracteristicile noastre
- Proiectarea și optimizarea componentei de reacție de acoperire
Componenta de reacție de limitare este optimizată, iar producția de transcript ARNm este mult crescută.
- Verificarea expresiei in vitro
ARNm acoperit este transfectat în celule 293T, iar expresia proteinei țintă poate fi detectată.
Prin controlul riguros al mediului experimental RNaseson și al consumabilelor, degradarea ARNm este prevenită în mod eficient.
Studiu de caz
Platforma mRNA Yaohai Bio-Pharma a construit un proces de reacție de plafonare perfect.
Pentru ARNm eGFP, un preprodus ARNm preparat prin acoperire enzimatică, un semnal de fluorescență eGFP (fluorescență verde) la un nivel ridicat poate fi observat după transfectarea celulelor 293T timp de 24 de ore, care este detectat de Western Blot (WB), demonstrând că Proteina verde fluorescentă îmbunătățită cu proteina țintă (eGFP) poate fi exprimată eficient in vitro.
Exprimarea mARN-ului eGFP cu acoperire enzimatică în celula 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NU
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
