Circular mRNA (circRNA) a fost folosit pe larg în studiul funcțiilor genelor sau proteinelor. În același timp, este popular în dezvoltarea biologicilor profilactice și terapeutice, similar cu mRNA.
Yaohai Bio-Pharma a dezvoltat un set de tehnologii de sinteză circRNA pentru a oferi RNA de înaltă calitate, cum ar fi proiectarea și optimizarea secvențelor, transcripția in vitro (IVT), circularizarea/ciclizarea, purificarea și incapsularea în nanoparticule lipide (LNP). Toate produsele sunt lansate sub standarde stricte de control al calității (QC).
Comparativ cu mRNA liniar, RNA circular (circRNA) este mai stabil din punct de vedere structural și reprezintă un punct major de interes în cercetarea actuală a medicamentelor nucleotidice. Are o gamă largă de aplicații în diferite domenii, indiferent dacă este circRNA codant sau non-codant, inclusiv vakcine preventive pentru boli infecțioase, vakcine terapeutice împotriva cancerului, medicamente terapeutice împotriva cancerului, terapia de înlocuire a proteinelor, medicina regenerativă, terapia celulară și genetică (CGT), rol de spons molecular și RNA aptamer.
Procesul | Serviciu Opțional | Detalii ale Serviciului | Perioadă de livrare (Zi) |
proiectare și Optimizare a Secvenței circRNA | Proiectare și optimizare a secvențelor codante | Optimizarea codonilor secvenței CDS | 1 |
Proiectare și optimizare a secvențelor necodificatoare | Proiectare și Optimizare a Secvențelor Intron și Exon, a Bratelor Homologe și a Spațiatorului | 1-2 | |
Prepararea Plasmidei Circulare | Sinteza genetică | Sinteză de Gene (Tertă) | 7-10 |
Amplificare Plasmid | Amplificare Plasmid | 2 | |
Extracție Plasmid | |||
Prepararea Plasmidului Linearizat | Liniarizare și purificare a plasmidei | Liniarizarea plasmidului | 1 |
Purificare ADN Linearizat | |||
Transcripție In Vitro și Ciclizare | Transcripție In Vitro și Ciclizare | Reacțiile de Transcripție In Vitro și Ciclizare | 1-2 |
Digestie cu RNase R | |||
Optimizare-opțională | Compoziție Reacție, Optimizare Timp | 2-5 | |
purificare circRNA | Metodă Convențională de Purificare | Precipitare cu clorură de litiu | 1 |
Purificare cu becuri magnetice | 1 | ||
Purificare circRNA de Oaltă Purtată | Cromatografie Lichidă de Performanță Înaltă Preparativă (HPLC) | 1-2 | |
Schimbare de buffer | Ultrafiltrare | 1 | |
liofilizare circRNA | Umplerea Eșantionului | Umplutura | 2-3 |
Liofilizare | Precongelare | ||
Usucătura primară (sublimare) | |||
Usucătura secundară (dezabsorpție) | |||
encapsulare circRNA-LNP | Encapsulare LNP | Pretreatment al Materialului și Lichidului | 2 |
Amestec cu Dispozitiv Microfluidic | |||
Schimbare de buffer | Filtrare prin Flux Tangențial | 1 | |
Steril | Filtrare | ||
Controlul Calității DNA Plasmidic | Concentrație/puritate | Spectrofotometrie Ultravioletă (UV) | 1-2 |
Conformațiune plasmid | Electroforeză în Gel de Agaroză (AGE) | ||
Electroforesă Capilară (CE) - Opțional | |||
Identificare a Plasmidului | Identificare Enzimă de Restricție/AGE | ||
Control Calitativ al circRNA | Concentrație/puritate | Spectrofotometrie Ultravioletă (UV) | - |
Puritate | Electroforesă în Gele de Agaroza (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC - opțional | 1 | ||
Control Calitativ al circRNA-LNP | Eficiența de Encapsulare | Metoda RiboGreen | 1 |
Dimensiune particule | Dispersia Luminii Dinamice (DLS) | 1 | |
Index de Polidispersitate | Dispersia Luminii Dinamice (DLS) | 1 | |
Potențial Zeta | Dispersia Luminii Dinamice (DLS) | 1 | |
Test de Potență Bazat pe Celule | Transfecție Celulară | Depunerea celulelor, transfecția celulară | 4 |
Detectarea Proteinei Țintă | Observație fluorescență, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Am transfectat circRNA cu proteina fluorescentă verde intensificată (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferaza circRNA în celulele 293T și am detectat proteinul țintă prin semnal fluorescență, luminescență sau culoare, western blot (WB), test imunoenzimatic (ELISA).
Teste de Potență bazate pe Celule ale Eșantillonilor circRNA de către Yaohai Bio-Pharma