În ceea ce privește producția în masă de ARNm, transcripția in vitro (IVT) este o metodă mai eficientă și mai matură. Reacția IVT adoptă ADN plasmid liniarizat care conține promotorul T7 ca matriță, iar ARNm este sintetizat cu nucleozide trifosfați (NTP) ca substrat în prezența ARN polimerazei T7.
Modificarea nucleotidelor este o descoperire în explorarea ARNm, în care moleculele de ARNm nemodificate sunt recunoscute de senzorii ARN intracelulari pentru a activa imunitatea înnăscută. Din motive de imunogenitate in vivo și eficiență a translației ARNm, procesul IVT utilizează de obicei anumite tipuri de NTP modificate, iar nucleotidele modificate comune sunt pseudouridina (Ψ), N1-metil-pseudouridina (N1Ψ) și 5-metilcitozină (5mC).
Procesul de transcripție in vitro a ARNm
Diagrama de reacție a transcripției in vitro (IVT).
Detalii despre servicii
Service optional |
Detalii despre servicii |
Perioada de livrare (zi lucrătoare) |
Transcriere in vitro (IVT) |
IVT, transcriere in vitro |
1 |
| Modificări ale nucleotidelor (Ψ/N1Ψ/5mC etc.) |
| Îndepărtarea șablonului ADN (DNaza I) |
Optimizarea condiției IVT - opțional |
Proiectarea și optimizarea componentelor de reacție IVT |
2-5 |
Caracteristicile noastre
- Strategii diversificate de modificare a nucleotidelor
Îmbunătățiți stabilitatea ARNm și expresia proteinei in vivo.
- Proiectare și optimizare riguroasă a testelor
Se poate realiza prepararea fragmentelor de ARNm de până la 10 kb.
Prin optimizarea condițiilor de reacție IVT, rata de transcriere este de până la 1:200.
Controlul strict al RNazei printr-un mediu experimental și consumabile poate preveni eficient degradarea ARNm.
Studiu de caz
Actualul sistem de reacție IVT este aproximativ optimizat pentru sistemele sintetice cu o lungime de aproximativ 100 nt, nu pentru ARNm de lungime arbitrară. Cu cât secvența de ARNm este mai lungă, cu atât este mai dificil de transcris și este mai predispusă la degradare.
Pentru a pregăti secvențe de ARNm personalizate cu o lungime de aproximativ 10 kb, Yaohai Bio-Pharma a pregătit cu succes probe de înaltă calitate cu un raport de transcripție ridicat de 1:135 și a obținut 135 μg de produse ARNm purificate inițial după 1 μg de plasmidă linearizată. a fost transcris in vitro printr-un design experimental riguros, optimizarea continuă a condițiilor de reacție și controlul strict al RNazei.
Identificare ARNm (electroforeză pe gel de agaroză)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NU
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
