Semnificația Dezvoltării Procesului Downstream (DSP)
Totorul întreg de fermentație conține proteina țintă sau plasmidul, precum și impurități legate de produs și proces, de exemplu agregate, substanțe celulare microbiene, Proteine Celulare de Gazdă (HCP), ADN Celular de Gazdă (HCD), endotoxine și antibiotice.
Prin urmare, este esențial să se proiecteze un DSP eficient, un proces de purificare care să elimine anumite impurități și să producă o substanță medicamentoasă extrem de purificată și de înaltă calitate. În plus, optimizarea procesului de purificare poate contribui la creșterea recuperării produsului, reducerea costurilor și îmbunătățirea scalabilității și reproductibilității procesului.
Cuvinte cheie: dezvoltare a procesului, optimizare și validare, proces de purificare, cromatografie, eliminare a impurităților, eliminare a HCP, eliminare a HCD, eliminare a endotoxinelor, denaturare a proteinelor și refoldare, asamblare VLP, conjugare
Aplicație: industria biofarmaceutică, medicina umană, medicina animală, vaccin, biomolecule recombinante mari, biologice recombinante, reagent biologic
Soluții DSP ale Yaohai Bio-Pharma
Avem o experiență vastă în izolarea proteinelor țintă sau plasmidelor din matrice complexe prin dezvoltarea și optimizarea procesului de purificare downstream. Există diferite tipuri de operațiuni unitare potrivite pentru purificarea biologilor, inclusiv centrifugare, filtre, homogenizare, lizare alcalină, ultrafiltrare, precipitare, denaturare a proteinelor și refoldare, cromatografie, etc.
Serviciile noastre disponibile de dezvoltare a purificării includ:
- Dezvoltarea întregului proces de purificare de la colectarea celulelor sau supernatantului până la ingredientul activ final.
- Optimizarea procesului de purificare bazată pe impuritățile legate de produs și de proces pentru a crește calitatea și siguranța produsului, de exemplu, HCP, HCD, endotoxină.
- Definirea și optimizarea parametrilor cheie în una sau mai multe operațiuni unitare, inclusiv lizarea celulelor, filtrele cu flux tangențial, testarea resinelor, cromatografia, denaturarea și refoldarea proteinelor, etc.
- Optimizarea procesului în ceea ce privește calitatea, rendita, recuperare, cost și scalabilitate.
- Validarea procesului de purificare downstream.
- Evaluarea bazată pe risc a intervalului de parametri și proiectarea experimentelor (DoE) în modelarea procesului.
Detalii ale Serviciului
Platformele standard de purificare a proteinelor sau plasmidelor sunt bazate pe mai multe pași de purificare brută și mai puțin de 4 pași de cromatografie, inclusiv captură, purificare intermediară și polire.
| Detalii ale Serviciului |
Operațiuni Unitare |
Parametrii |
| Purificare Brută |
Centrifugare |
Viteza de rotație, Timp |
| Homogenizare la presiune ridicată |
Conţinut total de solid, Presiune, Cicluri |
| Liza Alcalină Continuă |
Raportul dintre Celule Reluate și Soluția de Liza, Timp de Liza |
| Filtrare prin Flux Tangențial |
Material al Membranei și Dimensiunea Porilor, Rata de Flu flux alimentar Transpresiune Membranară (TMP), Raportul Volumului de Filtrat la Suprafața Membranei |
| Precipitare |
Tip și Concentrație a Precipitantului, Aditiv, pH, Temperatură, Timp |
| Denaturare și Refoldare |
Solubilizarea proteinelor din corpuri de incluziune |
Concentrație de denaturant (de exemplu, Urea, Guanidin HCl, Detergent Ionic Puternic), Detergenți (de exemplu, Sulfat de sodiu dodecil, SDS), Agente Reductoare (de exemplu, Ditiotreitol, DTT), Agente Cheleatoare (Acid Etilendiamintetraacetat, EDTA), Temperatură, Timp |
| Refoldare a proteinelor |
Metode de Refoldare (diluare, dializă sau refoldare SEC), Concentrații de Proteină, Bufere, pH, Temperatură, Timp, Agente Oxidante și Reductoare (de exemplu, Glutation, GSH/Oxidat Glutation, GSSH, DTT/GSSH, Cisteina/Cistine), Aditive Molecule Mici (L-arginină, Ureă, Guanidin/HCl, și Detergenți) |
| Captură, Purificare Intermediară și Finală |
AC (Cromatografie cu Afinitate) |
Diverse tipuri de rezină/coloană de cromatografie (de exemplu, AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Lungime și Diametru al Coloanei, Compoziția Buferei, Volumul de Injecție, Compoziția Fazei Mobile (Adsorpție și Dezabсорpție), pH, Rata de Flux, Condiții de Legare, Spălare și Eluare. |
| IEX (Cromatografie cu Schimbatori Ionici Anioni sau Cationi) |
| HIC (Cromatografie cu Interacțiune Hidrofobă) |
| Desalarea și/sau cromatografia de excludere a mărimii (SEC) |
| RPC (Cromatografia cu fază inversată) |
| MMC, cromatografia în mod mixt |
Studiu de caz
CASE 1
Suntem însușiți să dezvoltăm și optimizăm procesul de purificare downstream pentru a crește purețea proteinelor de la 85% la 90%, în timp ce reducem pașii de cromatografie.
Yaohai a furnizat un proces robust și scalabil de purificare în trei etape de cromatografie pentru proteină țintă, o alergenie bacteriană. Purețea finală a atins 95%.
CASE 2
Yaohai a fost desemnat de către clientul nostru să optimizeze procesul de eliminare a endotoxinelor pentru vaccinul cu particule simil-virus (VLP).
Echipa noastră a realizat optimizarea parametrilor de cromatografie și a pregătit o substanță medicamentoasă cu puretate de 98% și reziduuri de endotoxine de 12.8EU/mg.
Experiențele noastre
- Am fost implicați în dezvoltarea și fabricarea unei varietăți de molecule mari, inclusiv vaccinuri recombinante subunitare, VLPs, hormoni (insulină, GLP-1, hormonul de creștere), citokine (Interleucin-2/IL-2, IL-15, IL-21), factori de creștere (EGF, FGF, NGF), nanocorpuse/singur domeniu anticorpi (sdAbs), enzyme, etc.
Echipament
Folosim sisteme de top AKTA Pure, AKTA Avant și HPLC preparativ pentru executarea diferitelor metode de cromatografie, inclusiv cromatografie prin afinitate, schimb de ioni, interacțiune hidrofobă, fază inversă și cromatografie de excludere a mărimei.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
