Semnificația dezvoltării procesului în aval (DSP).
Întregul bulion de fermentație conține proteină țintă sau plasmidă, precum și impurități legate de produs și proces, de exemplu, agregate, substraturi de celule microbiene, proteine celule gazdă (HCP), ADN celulei gazdă (HCD), endotoxină și antibiotice.
Prin urmare, este esențial să se proiecteze un proces eficient de purificare DSP, pentru a elimina anumite impurități și a produce o substanță medicamentoasă foarte purificată și de înaltă calitate. În plus, optimizarea procesului de purificare poate ajuta la creșterea recuperării produsului, la reducerea costurilor și la îmbunătățirea scalabilității și reproductibilității procesului.
Cuvinte cheie: dezvoltare proces, optimizare și validare, proces de purificare, cromatografie, eliminarea impurităților, îndepărtarea HCP, eliminarea HCD, îndepărtarea endotoxinelor, denaturarea și replierea proteinelor, asamblarea VLP, conjugare
Aplicație: Industria biofarmaceutică, medicina umană, medicina animală, vaccin, substanțe biologice recombinate cu molecule mari, substanțe biologice recombinate, reactiv biologic
Soluțiile DSP ale Yaohai Bio-Pharma
Avem o experiență vastă în izolarea proteinelor țintă sau plasmidelor din matrice complexe prin dezvoltarea și optimizarea procesului de purificare în aval. Există diferite tipuri de operații unitare potrivite pentru purificarea produselor biologice, inclusiv centrifugare, filtrare, omogenizare, liză alcalină, ultrafiltrare, precipitare, denaturare și repliere a proteinelor, cromatografie etc.
Serviciile noastre de dezvoltare de purificare disponibile includ:
- Dezvoltarea întregului proces de purificare de la colectarea celulelor sau a supernatantului până la ingredientul activ final.
- Optimizarea procesului de purificare pe baza impurităților legate de produs și proces pentru a crește calitatea și siguranța produsului, de exemplu, HCP, HCD, endotoxină.
- Definirea și optimizarea parametrilor cheie în una sau mai multe operații unitare, inclusiv liza celulară, filtrarea în flux tangențial, screening-ul cu rășini, cromatografia, denaturarea și replierea proteinelor etc.
- Optimizarea procesului în termeni de calitate, randament, recuperare, cost și scalabilitate.
- Validarea procesului de purificare din aval.
- Evaluarea intervalului de parametri bazată pe risc și Design of Experiments (DoE) în modelarea proceselor.
Detalii despre servicii
Platformele standardizate de purificare a proteinelor sau plasmidelor se bazează pe mai multe etape de purificare brută și mai puțin de 4 etape de cromatografie, incluzând captarea, purificarea intermediară și lustruirea.
| Detalii despre servicii |
Operațiuni de unitate |
parametrii |
| Purificare brută |
Centrifugarea |
Viteza de rotație, timp |
| Omogenizare la presiune înaltă |
Conținut solid total, presiune, cicluri |
| Liză alcalină continuă |
Raportul dintre celulele resuspendate și soluția de liză, timpul de liză |
| Filtrare cu flux tangenţial |
Materialul membranei și dimensiunea porilor, debitul de alimentare Presiunea transmembranară (TMP), raportul dintre volumul de filtrare și suprafața membranei |
| Precipitare |
Tipul și concentrația precipitantului, aditiv, pH, temperatură, timp |
| Denaturare și repliere |
Solubilizarea proteinelor corporale de incluziune |
Concentrație de denaturant (de exemplu, uree, guanidină HCI, detergent ionic puternic), detergenți (de exemplu, dodecil sulfat de sodiu, SDS), agenți reducători (de exemplu, ditiotreitol, DTT), agenți de chelare (acid etilendiaminotetraacetic, EDTA), temperatură, timp |
| Replierea proteinelor |
Metode de repliere (diluare, dializă sau repliere SEC), concentrații de proteine, tampon, pH, temperatură, timp, agenți oxidanți și reducători (de exemplu, glutation, GSH/glutation oxidat, GSSH, DTT/GSSH, cisteină/cistina), aditivi pentru molecule mici (L-arginină, uree, guanidină/HCl și detergenți) |
| Captură, purificare intermediară și lustruire |
AC (cromatografie de afinitate) |
Mai multe tipuri de rășină/coloană de cromatografie (de exemplu, AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), lungimea și diametrul coloanei, compoziția tamponului, volumul de injectare, compoziția în fază mobilă (adsorbție și desorbție), pH, debit, legare, Condiții de spălare și eluare. |
| IEX (cromatografie cu schimb de anioni sau cationi) |
| HIC (cromatografie de interacțiune hidrofobă) |
| Cromatografia de desalinizare și/sau de excludere dimensională (SEC) |
| RPC (cromatografie în fază inversă) |
| MMC, cromatografie în mod mixt |
Studiu de caz
Cauza 1
Suntem însărcinați să dezvoltăm și să optimizăm procesul de purificare din aval pentru a crește puritatea proteinei de la 85% la 90%, reducând în același timp etapele de cromatografie.
Yaohai a oferit un proces de purificare robust și scalabil cu 3 pași de cromatografie pentru proteina țintă, o alergie bacteriană. Iar puritatea finală a ajuns la 95%.
Cauza 2
Yaohai a fost desemnat de clientul nostru să optimizeze procesul de îndepărtare a endotoxinelor din vaccinul cu particule asemănătoare virusului (VLP).
Echipa noastră a efectuat optimizarea parametrilor cromatografiei și a preparat o substanță medicamentoasă cu puritate de 98% și reziduu de endotoxină de 12.8EU/mg.
Experiențele noastre
- Am fost implicați în dezvoltarea și fabricarea diferitelor molecule mari, inclusiv vaccinuri subunități recombinate, VLP, hormoni (insulina, GLP-1, hormon de creștere), citokine (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21). ), factori de creștere (EGF, FGF, NGF), nanocorpi/anticorpi cu un singur domeniu (sdAbs), enzime etc.
Echipament
Folosim sisteme HPLC AKTA Pure, AKTA Avant și Preparative de lider în industrie pentru efectuarea diferitelor metode de cromatografie, inclusiv cromatografia de afinitate, schimb de ioni, interacțiune hidrofobă, fază inversă și cromatografia de excludere a mărimii.
RO
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NU
PL
PT
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
