Datele de cartografiere a peptidelor bazate pe cromatografie lichidă-spectrometrie de masă (LC-MS) vor oferi o cantitate mare de informații despre structura de ordin primar și superior a proteinelor native și recombinante, inclusiv acoperirea secvenței de aminoacizi, modificări post-translaționale (PTM, de exemplu, glicozilare). , oxidare, deamidare), legături disulfurice etc.
Yaohai Bio-Pharma oferă servicii de analiză de cartografiere a peptidelor pentru proteina țintă prin LC-MS, pentru a vă accelera cercetarea asupra structurii proteinelor.
Am fost implicați în caracterizarea structurală a proteinelor a diferitelor molecule mari, inclusiv vaccinuri subunități recombinante, nanocorpi/VHH/anticorpi cu un singur domeniu (sdAbs), fragmente de anticorpi, hormoni/peptide, citokine, factori de creștere (GF), enzime, colageni, etc.
Cerințe de reglementare pentru cartografierea peptidelor
Ghidul ICHQ6B recomandă: „Fragmentarea selectivă a produsului în peptide discrete este efectuată folosind enzime sau substanțe chimice adecvate, iar fragmentele de peptide rezultate sunt analizate prin HPLC sau altă procedură analitică adecvată. Fragmentele de peptide trebuie identificate pe cât posibil folosind tehnici precum analiza compoziției aminoacizilor, secvențierea N-terminală sau spectrometria de masă (MS). Cartarea peptidelor a substanței active sau a produsului medicamentos (DP) folosind o metodă validată corespunzător este o metodă adesea folosită pentru a confirma structura dorită a produsului pentru eliberarea lotului.”
Metode de analiză
| Analiză |
Aplicate |
| Cartografierea peptidelor |
Digestia cu protează și cromatografie lichidă-spectrometrie de masă (LC-MS) |
Procedura analitică
1. Reducere și alchilare
Scopul este de a reduce punțile disulfurice și de a bloca tiolul liber generat. Reducerea punților disulfurice ajută la deschiderea structurii proteinei, ceea ce face digestia proteolitică mai eficientă. Acest pas va rupe, de asemenea, punțile dintre lanțuri în cazul proteinelor cu mai multe lanțuri care au punți disulfurice care leagă lanțurile (de exemplu, anticorpi monoclonali, mAbs).
2. Digestia proteinelor folosind enzime
Scopul este de a descompune proteinele în peptide. Am ales enzimele pe baza secvenței teoretice a proteinei și cunoștințele despre digestia teoretică a proteinei de către enzime. Alegând enzimele în acest fel, ar trebui să rezulte cea mai bună analiză de cartografiere a peptidelor.
3. Analiza peptidelor digerate Utilizarea cromatografiei lichide de înaltă performanță cu fază inversă on-line cu detectie spectrometrică de masă cu ultraviolete (UV) și electrospray-masă (LC/ES-MS).
Separarea peptidelor pe baza polarității utilizând LC (fază inversă-LC)
Pe măsură ce peptida eluează din coloana LC, spectrometrul de masă va genera informații de masă împreună cu informații despre ionii de fragment, ceea ce ne permite să determinăm informațiile secvenței. Folosim informațiile de secvență pentru a confirma identitatea peptidei și pentru a furniza informații primare.
De asemenea, putem genera informațiile de fragmentare din peptide pe măsură ce acestea intră în sursa spectrometrului de masă din coloana LC. În funcție de cerințele studiului, aceasta este fie LC-MS/MS selectivă, fie neselectivă, care poate fi considerată ca o formă de MS tandem.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NU
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
