Datele de peptide mapping bazate pe Cromatografia Lichidă-Spectrometrie de Masă (LC-MS) vor oferi o cantitate mare de informații despre structura primară și de ordine superioară a proteinelor native și recombinante, inclusiv acoperirea secvenței de aminoacizi, modificările post-traducționale (MTs, de exemplu, glicosilarea, oxidarea, deamidarea), legăturile disulfurice, etc.
Yaohai Bio-Pharma oferă servicii de analiză a peptide mapping-ului pentru proteinul țintă folosind LC-MS, pentru a accelera cercetarea dumneavoastră privind structura proteinului.
Am fost implicați în Caracterizarea Structurii Proteicilor a diferitelor molecule mari, inclusiv Vacine Recombinante Subunitare, Nanocorpuri/VHHs/ Antibodii Unidomene (sdAbs), Fragmente de Antibodii, Hormoni/Peptide, Citochine, Factori de Creștere (GF), Enzime, Collagene, etc.
Exigente Reglementare pentru Peptide Mapping
Ghidul ICHQ6B recomandă, „Fragmentarea selectivă a produsului în peptide discrete se efectuează folosind enzyme sau chimicale potrivite și fragmentele peptidice rezultate sunt analizate prin HPLC sau alte proceduri analitice adecvate. Fragmentele peptidice ar trebui identificate cât mai mult posibil folosind tehnici precum analiza compoziției de aminoacizi, secvențarea terminală N sau spectrometria de masă (MS). Maparea peptidică a substanței active sau a produsului medicamentos (DP) folosind o metodă validată corespunzător este o metodă des utilizată pentru a confirma structura dorită a produsului la eliberarea lotului.”
Metode analitice
| Analiză |
Metode |
| Hartarea Peptidică |
Digestie cu Proteaza și Cromatografie Lichidă-Couplată cu Spectrometria de Masă (LC-MS) |
Procedură Analitică
1. Reducere și Alchilare
Scopul este de a reduce podurile de disulfur și a bloca tiolul liber generat. Reducerea podurilor de disulfur ajută la deschiderea structurii proteică, ceea ce face digestia proteolitică mai eficientă. Această etapă va destrama și podurile dintre lanțuri în cazul proteinelor cu mai multe lanțuri care au poduri de disulfur care leagă lanțurile (de exemplu, anticorpi monoclonali, mAbs).
2. Digestie a Proteinei Folosind Enzime
Scopul este de a descompune proteina în peptide. Am ales enzimele în funcție de secvența teoretică a proteinei și de cunoștințele despre digestia teoretică a proteinei prin enzime. Alegerea enzimelor în acest mod ar trebui să rezulte în cea mai bună analiză a hartii peptidice.
3. Analiza Pepticelor Digestate Folosind Cromatografia Lichidă de Performanță Înaltă Fază Inversă On-line cu Detectare Ultraviolettă (UV) și Detectare prin Spectrometrie de Masă cu Electrospray (LC/ES-MS).
Separarea pepticelor bazată pe polaritate folosind LC (fază inversă-LC)
Când peptidul se eliberează din coloana LC, spectrometrul de masă va genera informații despre masă împreună cu informații despre ionii fragment, ceea ce ne permite să determinăm informațiile despre secvență. Folosim informațiile despre secvență pentru a confirma identitatea peptidului și pentru a oferi informații primare.
Putem genera, de asemenea, informațiile de fragmentare ale peptidilor în timp ce aceștia intră în sursa spectrometrului de masă din coloana LC. În funcție de cerințele studiului, acest lucru este fie LC-MS/MS selectiv, fie ne-selectiv, ceea ce poate fi considerat o formă de MS tandem.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
