Ocuparea site-urilor de N-glicosilare este o caracteristică fiziologică a glicoproteinelor și produce în principal N-glicane. Serviciul de analiză a ocupării site-urilor de N-glicosilare oferit de Yaohai Bio-Pharma se realizează prin digestie, eliberare, concentrare și analiză folosind Cromatografia Lichidă-Electrospray Ionizare Spectrometrie de Masă-Spectrometrie de Masă (LC-ESI-MS/MS).
Am fost implicați în Caracterizarea Structurii Proteicilor a diferitelor molecule mari, inclusiv Vacine Recombinante Subunitare, Nanocorpuri/VHHs/ Antibodii Unidomene (sdAbs), Fragmente de Antibodii, Hormoni/Peptide, Citochine, Factori de Creștere (GF), Enzime, Collagene, etc.
Exigente Reglementare privind Ocuparea Site-urilor de N-glicosilare
Conform indicativelor ICH Q6B, „pentru glicoproteine, se determină conținutul de carbohidrati (zahăruri neutre, zahăruri aminotate și acizi sialici). De asemenea, structura lanțurilor de carbohidrati, modelul de oligosaharide (profil antennar) și locurile de glicosilare ale lanțului de polipeptid sunt analizate în cea mai mare măsură posibilă.”
Metodă Analitică
| Analiză |
Metode |
| Ocuparea Siturilor de N-glicosilare |
LC-MS după digestie cu deglicosidază și protează |
Proceduri
1. Digestie a proteinelor pentru a genera fragmente mici de peptidi.
2. Eliberarea N-glicanelor folosind endoglucozidaza H sau PNGase F. Endoglucozidaza H taie legătura dintre cele două reziduuri de GlcNAc din nucleul glicanelor legate N, în timp ce PNGase F este o glicoamidază care taie legătura dintre GlcNAc și Asn, eliberând întregul lanț de zahăruri și convertind Asn în Asp cu o creștere de masă de 1-Da.
3. Îmbogățirea N-glicopeptidelor prin HILIC (Cromatografia Lichidă cu Interacțiune Hidrofilă)
4. Analiza ocupației siturilor de glicosilare legate N folosind LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
