Proteinele recombinante văd adesea oxidarea lanțurilor laterale de aminoacizi expuse, cum ar fi triptofanul (Trp) și metionina (Met), modificând proprietățile fizico-chimice ale proteinelor. Aceste modificări pot contribui, la rândul lor, la alterarea funcțiilor biologice ale proteinelor afectate, cum ar fi pierderea legării, reducerea activității enzimatice, clearance-ul neașteptat de rapid. Proteinele sunt ținte importante pentru reacțiile oxidative, deoarece reacționează rapid cu oxidanții și sunt abundente în celule, țesuturi extracelulare și fluide corporale.
Prin urmare, monitorizarea oxidării proteinelor este esențială pentru dezvoltarea biofarmaceutică de succes.
Yaohai Bio-Pharma oferă serviciu de analiză a oxidării aminoacizilor, care vă permite să determinați oxidarea aminoacizilor prin cromatografie lichidă-spectrometrie de masă (LC-MS).
Am fost implicați în caracterizarea structurală a proteinelor a diferitelor molecule mari, inclusiv vaccinuri subunități recombinante, nanocorpi/VHH/anticorpi cu un singur domeniu (sdAbs), fragmente de anticorpi, hormoni/peptide, citokine, factori de creștere (GF), enzime, colageni, etc.
Cerințe de reglementare pentru oxidarea aminoacizilor
Conform ghidurilor ICH Q6B, formele oxidate pot fi detectate și caracterizate prin metode cromatografice, electroforetice și/sau alte metode analitice relevante (de exemplu, cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC), electroforeză capilară, spectroscopie de masă, dicroism circular).
Metode de analiză
| Analiză |
Aplicate |
| Oxidarea aminoacizilor |
LC-MS, cromatografie lichidă de înaltă performanță cu fază inversă (RP-HPLC) sau cromatografia de interacțiune hidrofobă Cromatografia lichidă de înaltă performanță (HIC-HPLC) și spectrometrie de masă |
Proceduri analitice
1. Pregătirea probei
2. LC-MS
3. Analiza datelor
Reziduurile de triptofan (Trp) sunt deosebit de predispuse la oxidare din cauza reactivității ridicate a indolului aromatic cu speciile reactive de oxigen. Oxidarea Trp necesită o anumită expunere a reziduurilor Trp care sunt în mod normal îngropate în structura tridimensională a proteinei.
Cu toate acestea, atunci când reziduurile de Trp sunt oxidate, ele se pot transforma într-o varietate de produse cu proprietăți foarte diferite față de Trp original. Cea mai comună cale pentru oxidarea Trp include formarea de N-formilkinurenin (diferența de masă: +32).
Un alt aminoacid oxidat frecvent este metionina. Atomul de sulf din reziduul Met poate accepta fie unul sau doi atomi de oxigen conducând la formarea de sulfoxid (diferență de masă: +16) sau sulfonă (diferență de masă: +32), în mod corespunzător. Această modificare este relativ comună datorită expunerii la suprafață de obicei ridicată a Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NU
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
