mRNA este utilizat pe scară largă în studiile privind funcțiile genelor sau proteinelor. În același timp, este obișnuit în dezvoltarea biologicilor profilactice și terapeutice. Ca o strategie comună de sinteză a moleculelor RNA, transcrierea in vitro (IVT) ne permite să obținem tranzcripte personalizate eficient.
Yaohai Bio-Pharma a dezvoltat un set de tehnologii de sinteză mRNA pentru a oferi RNA de înaltă calitate, cum ar fi proiectarea și optimizarea secvențelor, IVT, purificare, liofilizare și incapsulare în nanoparticule lipide (LNP). Toate produsele sunt eliberate sub standarde stricte de control al calității (QC).
Cu izbucnirea pandemiei COVID-19 în 2020, tehnologia mRNA a progresat cu sări mari, iar cercetările și aplicațiile legate de aceasta au cunoscut o dezvoltare fără precedent, inclusiv vakcine preventive împotriva bolilor infecțioase, vakcine terapeutice și medicamente împotriva cancerului, terapia tumorală, terapia de înlocuire a proteinelor, medicina regenerativă și terapia celulară și genetică (CGT).
vaccin mRNA | terapeutica mRNA |
|
Procesul | Serviciu Opțional | Detalii ale Serviciului | Perioadă de livrare (zi de lucru) | Rezultat |
proiectare și optimizare a secvenței mRNA | Proiectare și optimizare a secvențelor codante | Proiectare a secvenței CDS și optimizare a codonilor | 1-3 | Fișier secvență |
Proiectare și optimizare a secvențelor necodificatoare | Proiectare și optimizare a secvențelor UTR, polyA | |||
Prepararea plasmidei de templet pentru transcripție | Prepararea plasmidei recombinante | Sinteza genetică | 7-10 | |
Amplificare și extracție a plasmidei | 4 | |||
Liniarizare și purificare a plasmidei | ||||
transcripție In Vitro a mRNA | Închidere co-transcripțională (metoda într-un singur pas) | Transcripție in vitro (IVT) / Analog cap | 1-2 | N / A |
Modificări ale nucleotidilor (modificări UTP/CTP) | ||||
Eliminarea șablonului DNA (DNase I) | ||||
Închidere enzymatică (proces în două etape) | IVT | 2-3 | ||
Modificări ale nucleotidilor (modificări UTP/CTP) | ||||
Eliminarea șablonului DNA (DNase I) | ||||
purificare mRNA (precipitat de clorură de litiu/becuri magnetice) | ||||
Închidere enzymatică | ||||
purificare mRNA | Schema de purificare convențională | Precipitare cu clorură de litiu | 1 | substanță medicamentosă mRNA |
Purificare cu becuri magnetice | ||||
Schema de purificare cu coloană cromatografică | Combinație de mai multe metode de cromatografie | 1-2 | ||
Schimbare de buffer | Ultrafiltrare | 1 | ||
liofilizare mRNA | Liofilizare | Precongelare | 2-3 | pulbere liofilizată mRNA |
Usucătura primară (sublimare) | ||||
Usucătura secundară (dezabsorpție) | ||||
encapsularea mRNA | Encapsulare LNP | Encapsulare LNP | 2-3 | produs medicinal mRNA-LNP |
Concentrare și schimbare de buffer | ||||
analiza calității mRNA | substancia medicamentară mRNA / pudră liofilizată | Concentrație, puritate | 1 | Raport de testare |
Integritate, eficiență de capping, distribuție a cozii polyA | 2-5 | |||
produs medicamentos mRNA-LNP | Eficiența de Encapsulare | 1 | ||
Dimensiunea particulelor și distribuția | ||||
Sarcina de suprafață | ||||
validarea expresiei mRNA | evaluare celule 293T | Platirea celulelor | 4 | |
Transectare transitorie a celulelor | ||||
Observarea semnalului de fluorescență | 1-3 | |||
Western blot (WB) / Testul de imunoaderenta enzymatica (ELISA) |
cap 5' |
▪ Fără cap ▪ Cap0, co-capat ▪ Cap1, co-capat ▪ Cap1, inchidere enzymatică |
5' UTR/3' UTR |
▪ Secvență UTR naturală ▪ Secvență UTR mutată/inginerită |
coada 3' PolyA |
▪ Coada de 100A ~120A (recomandată) ▪ Coadă polyA segmentată ▪ Alte cozi personalizate |
Nucleoizi modificati |
▪ Baze nealterate ▪ Pseudouridina (Ψ) ▪ N1-Methylpseudouridina (N1Ψ) ▪ 5-metilcitozina (m5C) ▪ 5-metiluridina (m5U) ▪ 5-metoxyuridina (5moU) ▪ 2-tio-uridina (s2U) ▪ 2′-O-metil-U ▪ Alte modificări |
Flux de Servicii Integrat
Oferește o serie de servicii de la concepția secvenței din partea anterioară până la pregătirea mRNA, controlul calității și validarea expresiei în partea posterioră.
Concepție și Optimizare a Secvențelor la nivel Internațional
Proiectarea și optimizarea profesionistă a secvențelor mRNA facilită expresia eficientă a mRNA.
Modificări Nucleotidice Diversificate
Crește eficient expresia mRNA și reduc răspunsurile imune adverse ale mRNA.
Platformă de Purificare Matură
Prin combinarea unei metode convenționale de purificare și a unei metode auto-concepute, se obțin probe mRNA cu o puritytate ridicată.
Platformă QC Completă
Îmbogățește opțiunile QC pentru a satisface cerințele testelor rutine, cum ar fi concentrație, puretate A260/280 și integritate, precum și cerințele riguroase de control al calității, cum ar fi eficiența capping/polyA distribuție.
Livrare rapidă
MRNA personalizat poate fi livrat în termen de maxim 7 zile, cu excepția sintezei externe a secvenței.