Sleutelenzymen voor de productie van lang RNA
mRNA, als een soort lang coderend RNA, functioneerde tijdens COVID-19 veilig en efficiënt bij een breder scala aan mensen. Andere langcoderende RNA's, zoals zelfamplificerend RNA (saRNA) en circulair mRNA (circRNA), vertoonden ook efficiëntie in preklinische en klinische onderzoeken.
Grootschalige productie van lang coderend RNA is afhankelijk van in vitro transcriptie (IVT) door verschillende enzymatische reacties. De stappen van RNA-productie omvatten de bereiding van template-DNA, IVT-RNA-synthese, circulatie, DNA-verwijdering, RNA-modificatie (capping en tailing) en RNA-zuivering.
Er zijn verschillende sleutelenzymen die worden gebruikt bij de productie van lang coderend RNA (bijv. mRNA, saRNA en circRNA), waaronder restrictie-endonucleasen, T7-RNA-polymerase (T7 RNAP), RNase-remmer, anorganisch pyrofosfatase, DNase I, vaccinia-capping-enzym en RNase R.
|
Proces
|
Enzym
|
Functie
|
|
Sjabloon-DNA-voorbereiding
|
Restrictie endonucleasen
|
Linearisatie van plasmide-DNA (pDNA) om te voorkomen dat een langer transcript wordt gegenereerd.
|
|
IVT-RNA-synthese
|
T7 RNA-polymerase (T7 RNAP)
|
Bind aan de T7-promoter en genereer een specifiek RNA-transcript; Speel een sleutelrol tijdens de IVT-reactie.
|
|
RNase-remmer, recombinant
|
Rem RNase-activiteit tijdens IVT-reactie.
|
|
Pyrofosfatase, anorganisch (iPPase)
|
Voorkom pyrofosfaat tijdens IVT-reactie.
|
|
DNA-verwijdering
|
DNase ik
|
Verwijder de DNA-sjabloon.
|
|
RNA-modificatie
|
Vaccinia-afdekkend enzym
|
Voeg Cap1-structuren toe aan de 5'-uiteinden van IVT-mRNA.
|
|
2'-O-Methyltransferas
|
| circRNA-verrijking |
RNase R |
Verteren lineair RNA en verrijken circulair RNA. |
Yaohai Bio-Pharma biedt one-stop-CDMO-oplossing voor enzymen
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
