Aangepaste saRNA-synthese
Zelfamplificerend mRNA (saRNA), ook bekend als replicon-RNA, codeert voor in vitro transcriptie (IVT) mRNA-sequenties en virale replicasegenen afgeleid van alfavirus of flavivirussen. Virale replicasegenen maken de zelfamplificatie van het mRNA mogelijk, wat resulteert in verhoogde eiwitexpressie en een minimaal vereiste dosis RNA in vergelijking met niet-amplificerende mRNA's. Een ander aspect is dat saRNA een relatief groot molecuul is (meer dan 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma heeft een reeks mRNA-synthesetechnologieën ontwikkeld om niet-amplificerend mRNA en zelfversterkend mRNA (1000 nt ~ 14000 nt) te bieden, zoals sequentieontwerp en -optimalisatie, IVT, zuivering, lyofilisatie en inkapseling van lipide-nanodeeltjes (LNP). . Alle producten worden vrijgegeven onder strenge kwaliteitscontrolenormen.
Fig.1 Structurele kenmerken van IVT-mRNA's: conventioneel, circulair en zelfversterkend mRNA.
Sequentiekenmerken van zelfversterkend mRNA
Het zelfversterkende RNA omvat vier niet-structurele eiwitten (aangeduid als nsP1, nsP2, nsP3 en nsP4), die zijn afgeleid van alfavirussen, het Venezolaanse paardenencefalitisvirus (VEEV). Hiervan vertoont nsP1 dubbele enzymatische activiteiten, namelijk GTase en N7MTase, terwijl nsP2 RTPase-activiteit bezit, cruciaal voor het afdekken van het IVT-mRNA om de Cap 0-structuur te genereren. Bovendien fungeert nsP2 als een protease en helicase, waardoor de ingewikkelde verwerking van het gehele nP-complex wordt vergemakkelijkt. De precieze functie van nsP3 blijft ongrijpbaar, maar gaat interacties aan met diverse gastheerceleiwitten, waardoor het bijdraagt aan de verzwakking van de antivirale respons die door de gastheer wordt opgewekt.
Een subgenomische promotorregio van alfavirus (SGP) bevindt zich vóór het gen van belang (GOI). Het SGP-element vergemakkelijkt de initiatie van GOI-transcriptie door het lezen van de sequentie die codeert voor virale nsP-eiwitten te omzeilen.
Fig.2 Synthese en celtesten van eGFP-saRNA van Yaohai Bio-Pharma RNASci Platform.
Maatwerkoplossingen van saRNA
Het syntheseprotocol van saRNA is vergelijkbaar met mRNA: Aangepaste mRNA-synthese
- Sequentieontwerp
- Plasmidesjabloonvoorbereiding
- in vitro transcriptie (IVT)
- mRNA Enzymatische Capping
- mRNA Co-transcriptieafdekking
- mRNA-zuivering
- mRNA-lyofilisatie
- LNP-inkapseling
- Analyse en testen
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
