In vergelijking met de twee-staps enzymatische cappingmethode kan de een-staps co-transcriptionele cappingmethode het proces aanzienlijk vereenvoudigen. Deze methode is gericht op resultaat en houdt in dat cap-analogons worden toegevoegd aan de in vitro transcriptie (IVT)-reactie. Cap-analogons kunnen al tijdens het begin van de transcriptie worden ingevoerd, en mRNA met capstructuur kan worden verkregen wanneer de transcriptie voltooid is. Huidige derde-generatie cap-analogons kunnen omkerende capping vermijden en direct de Cap 1-structuur aan het transcriptieproduct toevoegen.
Bij het overwegen van de immunogeniteit van mRNA in vivo en de vertaalkundigheid, wordt het IVT-proces vaak uitgevoerd met bepaalde soorten gemodificeerde NTP's, en gangbare gemodificeerde nucleotiden zijn pseudouridine (Ψ), N1-methyl-pseudouridine (N1Ψ) en 5-methylcytosine (5mC).
Figuur: Diagram van mRNA Co-transcriptionele en Capping Reactie
Service Details
Dienst |
Service Details |
Leveringsperiode (werkdag) |
Co-transcriptioneel capping |
In vitro transcriptierespons (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Nucleotidemodificaties (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNA-sjabloon verwijdering (DNase I) |
Optimalisatie van IVT-condities - optioneel |
Ontwerp en optimalisatie van de reactiecomponenten |
3-7 |
Onze functies
- Verscheiden Nucleotide Modificatie Strategieën
Meerdere optionele nucleotide modificatie strategieën kunnen de eiwitsynthese verbeteren.
- Geoptimaliseerd reactiesysteem
Een hoge transcriptieratio en een hoge capping efficiëntie bereiken.
Een capping percentage van meer dan 95% bereiken.
- Streng controle van RNase
Effectief voorkomen van mRNA-degradatie door strikte controle van RNase in het experimentele milieu en verbruiksartikelen.
Gevalstudie
Yaohai Bio-Pharma heeft een volwassen co-transcriptioneel capping procesplatform ontwikkeld, waarbij schone cap-analogeu wordt gebruikt om direct de Cap1-structuur toe te voegen terwijl tegencapping wordt voorkomen. Na gestandaardiseerde monstersamplevoorbereiding en capillaire elektroforese (CE)-detectie kan het capping percentage van geïnhanceerde groene fluorescerende eiwit (eGFP) mRNA meer dan 95% bereiken.
eGFP mRNA capping efficiëntie van meer dan 95%
De eGFP mRNA en mCherry mRNA, voorbereid door co-transcriptioneel capping, worden respectievelijk in 293T-cellen getransfereerd, en er wordt een sterke fluorescerende signaal geobserveerd na 48 uur, wat suggereert dat de mRNA efficiënt wordt uitgedrukt in 293T-cellen.
Uitdrukking van eGFP mRNA en mCherry mRNA in 293T Cel
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
