Vergeleken met de enzymatische capping in twee stappen, kan de co-transcriptionele capping-methode in één stap de processtroom aanzienlijk verminderen. De methode is resultaatgericht en omvat de toevoeging van cap-analogen aan de in vitro transcriptie (IVT) reactie. Cap-analogen kunnen aan het begin van de transcriptie worden geïntroduceerd, en mRNA met cap-structuur kan na voltooiing van de transcriptie worden verkregen. De huidige cap-analogen van de derde generatie kunnen reverse capping vermijden en direct Cap 1-structuur aan het transcriptieproduct toevoegen.
Uit overwegingen van mRNA in vivo immunogeniciteit en translatie-efficiëntie gebruikt het IVT-proces vaak bepaalde soorten gemodificeerde NTP's, en veel voorkomende gemodificeerde nucleotiden zijn pseudouridine (Ψ), N1-methyl-pseudouri-dine (N1Ψ) en 5-methylcytosine (5mC) .
Figuur: Diagram van mRNA-cotranscriptionele en capping-reactie
dienst Details
Diensten | dienst Details | Leveringsperiode (werkdag) |
Co-transcriptionele limiet | In vitro transcriptionele respons (Clean Cap-analoog) | 1-2 |
| Nucleotidemodificaties (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Verwijdering van DNA-sjabloon (DNase I) |
IVT-conditieoptimalisatie - optioneel | Ontwerp en optimalisatie van reactiecomponenten | 3-7 |
Onze kenmerken
- Gediversifieerde strategieën voor nucleotidemodificatie
Meerdere optionele nucleotidemodificatiestrategieën kunnen de eiwitexpressie verbeteren.
- Geoptimaliseerd reactiesysteem
Bereik een hoge transcriptieverhouding en hoge capping-efficiëntie.
Bereik een limietpercentage van meer dan 95%.
- Strenge controle van RNase
Voorkom de afbraak van mRNA effectief door RNase in de experimentele omgeving en verbruiksartikelen strikt te controleren.
Casestudy
Yaohai Bio-Pharma heeft een volwassen co-transcriptioneel capping-procesplatform gebouwd, waarbij gebruik wordt gemaakt van clean cap-analogen om direct de Cap1-structuur toe te voegen en tegelijkertijd reverse capping te vermijden. Na gestandaardiseerde monstervoorbehandeling en capillaire elektroforese (CE) detectie kan de capping-snelheid van verbeterd groen fluorescerend eiwit (eGFP) mRNA meer dan 95% bereiken.
eGFP-mRNA-capping-efficiëntie van meer dan 95%
Het eGFP-mRNA en mCherry-mRNA bereid door co-transcriptionele capping worden respectievelijk getransfecteerd in 293T-cellen en na 48 uur wordt een sterk fluorescent signaal waargenomen, wat suggereert dat het mRNA efficiënt tot expressie wordt gebracht in 293T-cellen.
Expressie van eGFP-mRNA en mCherry-mRNA in 293T-cel
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
