Yaohai Bio-Pharma bereidt circRNA voor op basis van het PIE-systeem (uitlijning van exons en introns), dat afhankelijk is van de zelfsplitsende functie van type I-introns om RNA-cyclisatie te bereiken. De PIE-structuur is ontworpen met behulp van het T4-td-gen of het fishy-tRNA-voorlopergen, en de indeling is als volgt:
Het RNA-intron en het ondersteunende exonfragment zijn verdeeld in twee delen (5'-terminale en 3'-terminale), waarbij de 5'-terminale sequentie wordt overgebracht naar de staart van de doelsequentie, de 3'-terminale sequentie wordt ingevoegd in de voorkant van de doelsequentie. doelsequentie, en de doelgensequentie wordt in het midden ingevoegd.
Onder de katalyse van GTP leidt de PIE-structuur tot de cyclisatie van andere sequenties dan introns. Gecombineerd met een redelijke verbeteringsstrategie van de cyclisatiesnelheid kan Yaohai Bio-Pharma cyclisatie van sequenties tot 4 kb bereiken met een cyclisatiesnelheid van meer dan 80%.
Figuur 1. In vitro circulatie van circRNA op basis van het PIE-systeem
Dienstendetails
| Proces |
Optionele dienst |
dienst Details |
Leveringsperiode (werkdag) |
| circRNA-sequentieontwerp en -optimalisatie |
Ontwerp en optimalisatie van coderende sequenties |
Uitlijning van CDS-sequenties
CDS-codonoptimalisatie
|
1 |
| Ontwerp en optimalisatie van niet-coderende sequenties |
Ontwerp en optimalisatie van intron- en exonsequenties
Ontwerp en optimalisatie van homologe armsequenties
Ontwerp en optimalisatie van spacersequenties
|
1-2 |
Gemeenschappelijke strategieën voor mRNA-sequentieontwerp
| CircRNA-componenten |
Biologische functies |
Optimalisatiestrategieën |
| Tweeterminale intron- en exonsequenties |
GTP-gekatalyseerde intron-zelfsplitsing voor cyclisatie van sequenties buiten het intron. |
Ontworpen volgens het T4 td-gen of visolie-tRNA-voorlopergen. |
| codering |
IRES |
Interne ribosoomherkenningsplaats die de vertaling van circRNA reguleert. |
Screening van sequenties van de interne ribosoomingangsplaats (IRES) uit verschillende virale bronnen, bijv. EMCV- en CVB3-bronnen. |
| CDS |
Eiwitcoderende gebieden, sequenties die coderen voor antigenen, antilichamen of andere functionele eiwitten. |
Codonoptimalisatie verhoogt het translatieniveau; bepaalde niet-optimale codons kunnen een rol spelen bij het vouwen van eiwitten. |
| Niet-coderend |
Niet-coderende sequenties |
Richt u op miRNA's of eiwitten om gen- of eiwitregulatie uit te oefenen. |
Door zich te richten op specifieke bindingsplaatsen voor miRNA's of eiwitten kunnen de sequenties van de bindingsplaats worden herhaald. |
Onze kenmerken
- Geoptimaliseerd PIE-cyclisatiesysteem Combinatie met redelijke optimalisatiestrategieën om een cyclisatiepercentage van meer dan 80% te bereiken;
- Geavanceerd CDS-optimalisatieteam Samenwerking met een professioneel AI-algoritmeteam om de optimalisatie van CDS-regiocodons te voltooien;
- Volwassen en perfecte procescircRNA kan worden bereikt met een hoge cyclisatie-efficiëntie, hoge stabiliteit en hoge translatie-efficiëntie.
Casestudy
Yaohai Bio-Pharma lanceerde het controleproduct verbeterde groen fluorescerend eiwit (eGFP) circRNA, dat is gebaseerd op het PIE-systeem om de cyclisatie van RNA te bereiken.
Met behulp van een conventioneel transfectiereagens wordt eGFP-circRNA getransfecteerd in 293T-cellen en kan het eGFP (groen) fluorescentiesignaal na 24 uur worden gedetecteerd, dat na 48 uur zal worden versterkt. Het fluorescentiesignaal kan nog steeds worden gedetecteerd op de 7e dag en de 14e dag erna. transfectie.
In vitro expressievalidatie van eGFP-circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
