CircRNA-preparatie vereist lineaire RNA als voorgangermateriaal (RNA-voorganger) voor cyclisatie, waarbij het RNA-voorgangermateriaal doorgaans wordt bereid met behulp van gelinieariseerd plasmid-DNA als transcriptietemplate en in vitro wordt getranscribeerd met hulp van T7 RNA-polymerase.
Hoge-kwaliteitsplasmid-DNA is essentieel voor in vitro transcriptie (IVT). Op basis van het volwassen plasmidvoorbereidingserviceplatform kan Yaohai Bio-Pharma een service bieden voor de preparatie van hoogzuiver en standaard gelinieariseerd plasmid-DNA (pDNA) om de integriteit van IVT-producten te garanderen.
Service Details
| Proces |
Optionele Diensten |
Service Details |
Leveringsperiode (werkdag) |
| Circular Plasmid Bereiding |
Genesynthese |
Gene Synthese (Derdenpartij) |
7-10 |
| Plasmidvermenigvuldiging |
Plasmidvermenigvuldiging |
2 |
| Plasmidextractie |
| Linearisatie van plasmidpreparaten |
Plasmidlinearisatie en -purificatie |
Plasmidlineariseren |
1 |
| DNA-linearisatiezuivering |
| Plasmid DNA kwaliteitscontrole |
Concentratie zuiverheid |
Ultraviolet (UV) Spectrofotometrie |
1-2 |
| Plasmidconformatie |
Agarose Gel Electrophorese (AGE) |
| Capillaire Electrophorese (CE) - Optioneel |
| Plasmid identificeren |
Restrictie-enzymidentificatie\/AGE |
Onze functies
Flexibele selectie van linearisatiemethoden
Optimalisatie van DNA-extractie- en zuiveringsmethoden om hoge herstelraten te bereiken.
- Strenge kwaliteitscontrole
Streng procescontrolestandaard, met een supercoiled conformatieratio van plasmidmonsters voor onderzoek van meer dan 80%.
Hoge standaard en efficiënte plasmidbereiding- en kwaliteitscontroleservices om experimentele behoeften te voldoen.
Gevalstudie
Met het product mCherry circRNA van Yaohai Bio-Pharma als voorbeeld is de supercoiledratio van transcriptiemodelplasmidmonsters (onderzoeksgraad) meer dan 70%, met een linearisatieratio van bijna 100%.
mCherry circRNA wordt bereid met een lineariseerd plasmid als sjabloon en getransfereerd in 293T-cellen. Een hoog niveau van fluorescerende expressie (rode fluorescentie) wordt gedetecteerd na 24 uur post-transfectie, wat na 48 uur versterkt wordt, en nog steeds gedetecteerd kan worden op de 7e dag en de 14e dag na transfectie.
mCherry-eiwit wordt stabiel en efficiënt uitgedrukt, en de zuiverheid van het transcriptiesjabloon voldoet aan de eisen voor circRNA geneesmiddelenproduct (DP) van hoge kwaliteit.
In vitro expressievalidatie van mCherry circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
