Voor de bereiding van CircRNA is lineair RNA nodig als precursormateriaal (RNA-precursor) voor cyclisatie, waarbij de RNA-precursor gewoonlijk wordt bereid met behulp van gelineariseerd plasmide-DNA als transcriptiesjabloon en in vitro wordt getranscribeerd met behulp van T7-RNA-polymerase.
Plasmide-DNA van hoge kwaliteit is essentieel voor in vitro transcriptie (IVT). Gebaseerd op het volwassen serviceplatform voor plasmidevoorbereiding, kan Yaohai Bio-Pharma een zeer zuivere en standaard gelineariseerde plasmide-DNA (pDNA) voorbereidingsservice bieden om de integriteit van IVT-producten te garanderen.
Dienstendetails
| Proces |
Optionele dienst |
dienst Details |
Leveringsperiode (werkdag) |
| Preparaat van circulaire plasmiden |
Gen synthese |
Gensynthese (derden) |
7-10 |
| Plasmide-amplificatie |
Plasmide-amplificatie |
2 |
| Plasmide-extractie |
| Gelineariseerde plasmidebereiding |
Plasmide-linearisatie en -zuivering |
Linearisatie van plasmiden |
1 |
| Linearisatie DNA-zuivering |
| Kwaliteitscontrole van plasmide-DNA |
Concentratie zuiverheid |
Ultraviolette (UV) spectrofotometrie |
1-2 |
| Plasmide conformatie |
Agarosegelelektroforese (AGE) |
| Capillaire elektroforese (CE)-optioneel |
| Plasmide identificeren |
Identificatie van restrictie-enzymen/AGE |
Onze kenmerken
Flexibele selectie van linearisatiemethoden
Optimalisatie van DNA-extractie- en zuiveringsmethoden om hoge terugwinningspercentages te bereiken.
- Strenge kwaliteitscontrole
Strenge procescontrolenormen, met een superhelisch conformatiepercentage van plasmidemonsters voor onderzoek van meer dan 80%.
Hoogwaardige en zeer efficiënte plasmidevoorbereiding en kwaliteitscontrolediensten om aan experimentele behoeften te voldoen.
Casestudy
Als we het product mCherry circRNA van Yaohai Bio-Pharma als voorbeeld nemen, is de supercoiled-verhouding van transcriptiesjabloonplasmidemonsters (onderzoekskwaliteit) meer dan 70%, met een linearisatiepercentage van bijna 100%.
mCherry circRNA wordt bereid met gelineariseerd plasmide als sjabloon en getransfecteerd in 293T-cellen. Een hoog niveau van fluorescentie-expressie (rode fluorescentie) wordt gedetecteerd na 24 uur transfectie, wat na 48 uur zal worden versterkt en nog steeds kan worden gedetecteerd op de 7e dag en de 14e dag na transfectie.
mCherry-eiwit wordt stabiel en efficiënt tot expressie gebracht en de zuiverheid van de transcriptionele sjabloon kan met hoge kwaliteit voldoen aan de vereisten van circRNA-medicijnproducten (DP).
In vitro expressievalidatie van mCherry circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
