De basis van inkapseling is het ontwerp en de ontwikkeling van het toedieningssysteem. Een goed ontworpen afgiftesysteem zorgt ervoor dat circRNA-moleculen het lichaam kunnen binnendringen zonder te worden afgebroken door RNA-enzymen en vervolgens effectief op de doellocatie worden afgeleverd, het celmembraan passeren en intracellulair worden vrijgegeven.
Lipide nanodeeltjes (LNP's) zijn het beste afgiftesysteem dat beschikbaar is, met voordelen op het gebied van inkapseling, in vivo expressie en in vivo veiligheid vergeleken met andere afgiftesystemen. LNP's met nucleïnezuurfragmenten worden gemakkelijk in cellen ingeslikt en vormen intracellulaire lichamen. Eenmaal de cel binnengegaan, protoneert de zure omgeving van het intracellulaire lichaam en laadt de kop van het geïoniseerde lipide positief op, waardoor het versmelt met het binnenmembraan van het intracellulaire lichaam en het doelnucleïnezuur in de cel vrijkomt voor actie.
Yaohai Bio-Pharma circRNA-service blijft verbeteren en kan circRNA-LNP-inkapselingsservice bieden om relevante kritische procesparameters te optimaliseren en de consistentie en reproduceerbaarheid van de productie van circRNA-geneesmiddelen te verbeteren.
Proces | dienst Details | Leveringsperiode (dag) | Deliverables |
circRNA-LNP-inkapseling | Materiaal- en vloeistofvoorbehandeling | 2 | circRNA-LNP geneesmiddelproduct (DP) |
Mengen van microfluïdische apparaten | |||
Tangentiële stroomfiltratie | 1 | ||
Steriliserende filtratie | |||
circRNA-LNP-kwaliteitscontrole | Inkapselingsefficiëntie | 1 | Test rapport |
Deeltjesgrootte en polydispersiteitsindex | |||
zetapotentiaal |
Snelle synthese, hoge R&D-efficiëntie en vooraf geoptimaliseerde oplossingen;
De inkapselingsverhouding kan meer dan 90% bereiken;
De grootte van lipide-nanodeeltjes kan worden geregeld door de vloeistofinjectiesnelheid en -verhouding te veranderen;
circRNA-LNP-producten worden gevalideerd door in vitro celexpressie en kunnen het doeleiwit efficiënt tot expressie brengen.
LNP-eGFP circRNA-monsters worden bereid en de verschillende doses ervan (1 ug, 2 ug en 4 ug) worden direct getransfecteerd in 293T-cellen om te verifiëren of ze het doeleiwit tot expressie kunnen brengen. Na 48 uur transfectie kan een helder fluorescerend signaal worden waargenomen en is er een dosis-escalatie-effect van de fluorescentie-intensiteit.
Lipo-circ_eGFP, bestaande uit liposoom en niet-ingekapseld eGFP-circRNA, wordt als controle genomen.