Celgebaseerde potentietests
De betekenis van mRNA-potentietest
Met de snelle ontwikkeling van mRNA-vaccins en therapieën is een specifiek panel van analysemethoden nodig om de potentie te testen (het definiëren van hun biologische activiteit), waarbij de translationele efficiëntie van mRNA betrokken is. Deze methoden zijn doorgaans gebaseerd op celtransfectie en functionele testen van het doeleiwit.
Yaohai Bio-Pharma biedt celgebaseerde potentietests voor mRNA-medicijnsubstanties of LNP-producten, waaronder celtransfectie (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7-cellen, enz.) en ELISA- of Western Blotting (WB)-tests.
Regelgevende vereisten voor potentietests
Volgens de regelgevingsoverwegingen van de WHO moet “de potentie van elke partij van het uiteindelijke vaccin worden bepaald met behulp van een voldoende kwantitatieve en gevalideerde functionele methode(n). Potentiële in vitro potentietesten kunnen celgebaseerde transfectiesystemen of celvrije testen omvatten.” En de USP adviseerde een “celgebaseerde test” om de potentie van mRNA, dat wil zeggen de expressie van het doeleiwit, te testen.
Analytische methode
|
Analyse
|
Methoden
|
|
Potentietests
|
Celgebaseerde transfectie en doeleiwit identificeren:
293T-, HepG2-, HeLa-, K562-, U937-, Raw264.7-cellen, enz.
|
Procedure
Stap 1. Celgebaseerde transfectie met mRNA of mRNA-LNP
De cellen worden gekweekt en getransfecteerd met mRNA of mRNA-LNP. In detail wordt mRNA getransfecteerd nadat het is gemengd met een transfectiereagens, terwijl mRNA-LNP direct in de cellen wordt getransfecteerd. Na 24-48 uur wordt het supernatant dat het tot expressie gebrachte eiwit bevat, door centrifugatie geklaard.
Stap 2. Functionele tests van het doeleiwit
Voer ELISA- of WB-testen uit om de functionele binding van de doeleiwitten te beoordelen.
Casestudies
Celgebaseerde potentietests van mRNA-monsters
Yaohai-BioPharma heeft een celgebaseerde potentietestmethode voor mRNA ontwikkeld, waarbij celkweek, celtransfectie en eiwitfunctionele testen betrokken zijn. We transfecteerden eGFP-mRNA, mCherry-mRNA, luciferase-mRNA, spike-eiwit-mRNA in 293T-cellen en detecteerden doeleiwit via fluorescentie, luminescerend of gekleurd signaal, WB, ELISA.
Celgebaseerde potentietests van mRNA-producten door Yaohai Bio-Pharma
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
