Circulair mRNA (circRNA) wordt veel gebruikt bij de studie van gen- of eiwitfuncties. Ondertussen is het populair bij de ontwikkeling van profylactische en therapeutische biologische geneesmiddelen, vergelijkbaar met mRNA.
Yaohai Bio-Pharma heeft een reeks circRNA-synthesetechnologieën ontwikkeld om RNA van hoge kwaliteit te leveren, zoals sequentieontwerp en -optimalisatie, in vitro transcriptie (IVT), circularisatie/cyclisatie, zuivering en inkapseling van lipide nanodeeltjes (LNP). Alle producten worden vrijgegeven onder de strenge kwaliteitscontrolenormen (QC).
Vergeleken met lineair mRNA is circulair RNA (circRNA) stabieler van structuur en is het een belangrijke hotspot in het huidige onderzoek naar nucleïnezuurgeneesmiddelen. Het heeft een breed scala aan toepassingen op verschillende gebieden, of het nu gaat om coderend circRNA of niet-coderend circRNA, waaronder profylactische vaccins voor infectieziekten, therapeutische oncologische vaccins, therapeutische oncologische geneesmiddelen, eiwitvervangingstherapie, regeneratieve geneeskunde, cel- en gentherapie (CGT) , moleculaire sponsrol en RNA-aptameer.
Proces | Optionele dienst | dienst Details | Leveringsperiode (dag) |
circRNA-sequentieontwerp en -optimalisatie | Ontwerp en optimalisatie van codeersequenties | CDS-codonoptimalisatie | 1 |
Ontwerp en optimalisatie van niet-coderende sequenties | Intron- en Exon-sequentie, homoloog arm- en spacerontwerp en optimalisatie | 1-2 | |
Voorbereiding van circulaire plasmiden | gen synthese | Gensynthese (derde partij) | 7-10 |
Plasmide-amplificatie | Plasmide-amplificatie | 2 | |
Plasmide-extractie | |||
Gelineariseerde plasmidebereiding | Plasmide-linearisatie en -zuivering | Plasmide-linearisatie | 1 |
Linearisatie DNA-zuivering | |||
In vitro transcriptie en cyclisatie | In vitro transcriptie en cyclisatie | In vitro transcriptie- en cyclisatiereacties | 1-2 |
RNase R-vertering | |||
Optimalisatie-optioneel | Reactiesamenstelling, tijdoptimalisatie | 2-5 | |
circRNA-zuivering | Conventionele zuiveringsmethode | Neerslag van lithiumchloride | 1 |
Magnetische parelzuivering | 1 | ||
Zeer zuivere circRNA-zuivering | Preparatieve hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC) | 1-2 | |
Bufferuitwisseling | Ultrafiltratie | 1 | |
circRNA lyofilisatie | Monster vulling | Vulling | 2-3 |
vriesdrogen | Voorvriezen | ||
Primaire droging (sublimatie) | |||
Secundair drogen (desorptie) | |||
circRNA-LNP-inkapseling | LNP-inkapseling | Materiaal- en vloeistofvoorbehandeling | 2 |
Microfluïdische apparaatmenging | |||
Bufferuitwisseling | Tangentiële stroomfiltratie | 1 | |
gesteriliseerd | Filtratie | ||
Kwaliteitscontrole van plasmide-DNA | Concentratie/zuiverheid | Ultraviolette (UV) spectrofotometrie | 1-2 |
Plasmide conformatie | Agarosegelelektroforese (AGE) | ||
Capillaire elektroforese (CE) - optioneel | |||
Plasmide identificeren | Beperking Enzymidentificatie/AGE | ||
Kwaliteitscontrole van circRNA | Concentratie/zuiverheid | Ultraviolette (UV) spectrofotometrie | - |
Zuiverheid | Agarosegelelektroforese (AGE)/E-gel | 0.5 | |
HPLC-optioneel | 1 | ||
Kwaliteitscontrole van circRNA-LNP | Inkapselingsefficiëntie | RiboGreen-methode | 1 |
Deeltjesgrootte | Dynamische lichtverstrooiing (DLS) | 1 | |
Polydispersiteitsindex | Dynamische lichtverstrooiing (DLS) | 1 | |
Zetapotentiaal | Dynamische lichtverstrooiing (DLS) | 1 | |
Celgebaseerde potentietest | Celtransfectie | Celplating, celtransfectie | 4 |
Doeleiwit detecteren | Fluorescentiewaarneming, Western Blot/ELISA | 1-3 |
We transfecteerden verbeterd groen fluorescerend eiwit circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferase circRNA in 293T-cellen en detecteerden doeleiwit via fluorescentie, luminescerend of kleursignaal, western blot (WB), enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA).
Celgebaseerde potentietests van circRNA-monsters door Yaohai Bio-Pharma