5'-end capping is een essentiële modificatie van mRNA. mRNA's met cap-structuren, vooral Cap1-structuren, vergemakkelijken dat mRNA's in vivo aangeboren immuunreacties omzeilen, wat resulteert in een efficiënte eiwittranslatie.
Enzymatische capping (de tweestapsmethode) is de conventionele methode voor mRNA-capping, vergelijkbaar met het capping-proces bij eukaryotische organismen. Onder invloed van een reeks enzymen wordt 7-methylguanine (m7G) via een 5'-5'-trifosfaatbinding aan het 5'-uiteinde van mRNA gekoppeld en ondergaat het methyleringsmodificatie om de cap-structuur Cap 1 (m7GpppN) te vormen.
Diagram van de vorming van de natuurlijke kapstructuur
De enzymatische capping-reactiestroom is als volgt:
Gelineariseerd plasmide-DNA wordt gebruikt als sjabloon voor in vitro transcriptie (IVT) in aanwezigheid van T7-polymerase, en mRNA met een 5'-eindkapstructuur wordt gevormd na een eenstapszuivering met behulp van het vaccinia-capping-enzym en 2'-O -methyltransferase.
Dienstendetails
Optionele dienst |
dienst Details |
Leveringsperiode (dag) |
mRNA-enzymatische capping |
Enzymatische capping-reactie |
1 |
Reactieoptimalisatie afdekken - optioneel |
Ontwerp en optimalisatie van reactiecomponenten |
3 7 ~ |
Onze kenmerken
- Ontwerp en optimalisatie van de capping-reactiecomponent
De capping-reactiecomponent is geoptimaliseerd en de productie van mRNA-transcript is aanzienlijk verhoogd.
- In vitro expressieverificatie
Het afgedekte mRNA wordt getransfecteerd in 293T-cellen en de expressie van het doeleiwit kan worden gedetecteerd.
- Strenge controle van RNase
Door strenge controle van de experimentele omgeving en verbruiksartikelen van RNaseson wordt de afbraak van mRNA effectief voorkomen.
Casestudy
Het mRNA-platform van Yaohai Bio-Pharma heeft een perfect capping-reactieproces gebouwd.
Voor eGFP-mRNA, een mRNA-voorproduct bereid door enzymatische capping, kan een eGFP-fluorescentiesignaal (groene fluorescentie) op een hoog niveau worden waargenomen na transfectie van 293T-cellen gedurende 24 uur, wat wordt gedetecteerd door Western Blot (WB), wat aantoont dat de doeleiwit versterkt groen fluorescerend eiwit (eGFP) kan efficiënt in vitro tot expressie worden gebracht.
Expressie van enzymatisch afgedekt eGFP-mRNA in 293T-cellen
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
