Tag verwijderende proteasen
Om de oplosbaarheid te verbeteren en het zuiveringsproces van recombinante eiwitten te vereenvoudigen, voegen onderzoekers vaak fusie-tags toe, waarvan His-tag, maltoos-bindend eiwit (MBP) en glutathion-S-transferase (GST) veel gebruikt worden.
Hoewel een tag als een extra eiwitsequentie wordt toegevoegd, moet deze vaak worden verwijderd om de biologische activiteit in de farmaceutische industrie te behouden. Het verwijderen van fusie-tags vereist plaatsspecifieke proteasen, zoals enterokinase (EK), thrombine, tabaksetchvirus protease (TEVp), menselijke rhinovirus protease 3C (HRV3C), small ubiquitin modifying protein (SUMO) protease, tabakkenaderbevingvirus (TVMV) protease, en carboxypeptidase A/B (CPA/CPB).
Type
|
Enzym
|
Herkenningssite
|
Tag verwijderende endoproteasen
|
Enterokinase (EK), enteropeptidase
|
DDDDK↓
|
Thrombine
|
LVPR↓GS
|
TEV protease
|
ENLYFQ↓G
|
HRV3C protease
|
LEVLFQ↓GP
|
SUMO protease
|
SUMO tertiaire structuur
|
TVMV protease
|
ETVRFQG↓S
|
Tag verwijdering exoproteasen
|
Carboxypeptidase A (CPA)
|
C-terminale aminozuren, behalve Pro, Lys en Arg
|
Carboxypeptidase B (CPB)
|
C-terminale Lys en Arg
|
Andere proteasen
Sollicitatie
|
Enzym
|
Functie
|
Andere proteasen
|
Protease K
|
Een serineprotease die proteïnen vertelt door peptidgebindingen te hydrolyseren.
|
IdeS, IgG protease
|
IgG-degradende enzymen (Ides) die op een specifieke plaats van het immunoglobuline G (IgG) knippen, waardoor Fab- en Fc-fragmenten worden gegenereerd
|
IgA1 protease
|
Een proteolytische enzym dat specifieke plaatsen in de menselijke immunoglobuline A1 (IgA1) scharnierregio sequentie doorsnijdt.
|
Nuclease
Sollicitatie
|
Enzym
|
Functie
|
Nuclease
|
Nuclease
|
Knijpt nucleïnezuren (DNA of RNA) door hydrolyse van de fosfaatdiesterbindingen.
|
Restrictie enzym
|
Een endonuclease die DNA op of nabij specifieke posities knipt.
|
Amidase
Sollicitatie
|
Enzym
|
Functie
|
Amidase
|
PNGase F
|
Snijdt tussen de innerlijkste GlcNAc en asparagine resten van hoge mannose, hybride en complexe oligosachariden.
|
Yaohai Bio-Pharma biedt een volledige CDMO-oplossing voor enzymatische reagentia