Plasmid DNA, som vitro transcription (IVT) skabelon, er et vigtigt råmateriale til mRNA-fremstilling. Højt udbytte, høj oprensning og høj genvinding af plasmid-DNA er det vigtigste objektiv under plasmidprocesudvikling.
Yaohai Bio-Pharma leverer one-stop-løsning til plasmidudvikling, herunder upstream (fermentering), downstream (rensning) procesudvikling og proceskarakterisering og procesvalidering. Vi har stor erfaring med at forbedre plasmidudbyttet og isolere det fra komplekse matricer ved at udvikle og optimere fermenterings-, oprensnings- og urenhedsfjernelsesprocesser.
Grundlæggende bioproces til plasmidfremstilling inkluderer: Escherichia coli (E. coli) fermentering, cellehøst og alkalisk lyse, klaring, koncentrering, tre-trins kromatografiproces (fangst, mellemrensning og polering) og koncentrering.
Service detaljer | Enhedsdrift | parametre |
E. coli fermentering |
Ryst kolben | Mediesammensætninger, antibiotika, inokulumvolumen, væksttemperatur osv. |
fermentoren (7 L) |
Antibiotikum, inokulumvolumen, væksttemperatur, pH, opløst oxygen (DO), fodringstilstand (f.eks. fed-batch), fodringsmedier, fermenteringstid osv. |
|
Cellehøst | mikrofiltrering | standard E. coli høstproces |
Cellelyse | Celleresuspendering, alkalisk lysis, neutralisering | Alkaliforhold, lyseringstid |
Afklaring | Filtrering | Råfiltrering, 20 µm og et 5 µm filtertog (foretrukket) |
Koncentration | Ultrafiltrering, tangentiel flowfiltrering | Porestørrelse (eller NMWC), Transmembrantryk (TMP), Flux, filtratvolumen til membranarealforhold |
Tre-trins kromatografi | Størrelsesudelukkelseskromatografi (SEC) eller gelfiltreringskromatografi (GFC) | Kolonnelængde og diameter, buffersammensætning, injektionsvolumen, mobilfasesammensætning (adsorption og desorption), pH, flowhastighed, ækvilibrering, binding, vask og elueringsbetingelser. |
Affinitetskromatografi (AF) | ||
Anionbytningskromatografi (AEX) | ||
Koncentration | Ultrafiltrering, tangentiel flowfiltrering | Porestørrelse (eller NMWC), Transmembrantryk (TMP), Flux, filtratvolumen til membranarealforhold |
Flere biologiske rensningsprocesløsninger |