Molekulargewichtsbestimmung mittels LC-MS
Das intakte Molekulargewicht wurde schon immer als wichtiges Merkmal von Biologika angesehen. Die Analyse des intakten Molekulargewichts wird verwendet, um die Protein-/Peptidprodukte nachzuweisen und die Biologika zu verifizieren. Die Messung des Molekulargewichts ist eine Anforderung der regulatorischen Richtlinien.
Yaohai Bio-Pharma bietet Analysen des intakten Molekulargewichts unter nativen, reduzierten, N-deglykosylierten Bedingungen an. Zur Bestimmung des intakten Molekulargewichts verwenden wir Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS).
Regulatorische Anforderungen an das Molekulargewicht
In ICH Q6 wird empfohlen, dass „das Molekulargewicht (oder die Größe) mittels Größenausschlusschromatographie, SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (unter reduzierenden und nichtreduzierenden Bedingungen), Massenspektrometrie (MS) und anderen geeigneten Techniken bestimmt wird“.
Analytische Methoden
| Analyse |
Methoden |
| Molekulargewicht |
LC-MS / Flüssigchromatographie/Elektrospray-Massenspektrometrie (LC/ES-MS) von nativen, reduzierten, N-deglykosylierten Proteinen oder Untereinheiten |
Analytische Verfahren
Intaktes Molekulargewicht:
- Durchführen einer LC-MS an der nativen Probe wie erhalten.
- LC-MS-Datenanalyse.
Reduziertes Molekulargewicht:
- Behandeln der Proteinprobe mit einem geeigneten Reduktionsmittel;
- Durchführen einer LC-MS am reduzierten Protein;
- LC-MS-Datenanalyse.
N-deglykosyliertes Molekulargewicht:
- Entfernen der N-Glycane mit einem geeigneten Enzym;
- Durchführen einer LC-MS am N-deglykosylierten Protein;
- LC-MS-Datenanalyse.
Reduziertes und N-deglykosyliertes Molekulargewicht:
- Behandeln der Proteinprobe mit einem geeigneten Reduktionsmittel;
- Entfernen der N-Glycane mit einem geeigneten Enzym;
- Durchführen von LC-MS an reduziertem und N-deglykosyliertem Protein;
- LC-MS-Datenanalyse.
Molekulargewicht der Proteinuntereinheit:
- Untereinheitsspaltung
- Durchführen von LC-MS an Proteinuntereinheiten
- LC-MS-Datenanalyse
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