Die Profilierung von N-Glycanen ist für die Produktion von Biopharmazeutika unerlässlich. Yaohai Bio-Pharma bietet einen N-Glycan-Profilierungsdienst unter Verwendung von Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS) von freigesetzten und markierten Glykanen an. Die allgemeinen Schritte zur Vorbereitung von N-Glycan-Proben umfassen die Verdauung des Glykoproteins (GP), De-Glykosylierung, Reinigung, Markierung/Derivatisierung und Festphasenextraktion (SPE).
Wir waren an der Proteinstrukturcharakterisierung verschiedener großer Moleküle beteiligt, darunter rekombinante Untereinheitenimpfstoffe, Nanobodies/VHHs/Einzeldomänenantikörper (sdAbs), Antikörperfragmente, Hormone/Peptide, Zytokine, Wachstumsfaktoren (GF), Enzyme, Kollagene usw.
Regulatorische Anforderungen für das N-Glycan-Profiling
Gemäß der ICH Q6B-Richtlinie wird „bei Glykoproteinen der Kohlenhydratgehalt (Neutralzucker, Aminozucker und Sialinsäuren) bestimmt. Darüber hinaus werden die Struktur der Kohlenhydratketten, das Oligosaccharidmuster (Antennenprofil) und die Glykosylierungsstelle(n) der Polypeptidkette soweit möglich analysiert.
Analytische Methode
| Analyse |
Methoden |
| N-Glycan-Profilierung |
Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS)-Analyse von freigesetzten und markierten Glykanen |
Verfahren
1. Enzymatische Glykanfreisetzung mit Peptid-N-Glycosidase F (PNGase F)
2. Derivatisierung freigesetzter Glykane durch 2-Aminobenzamid (2-AB)
3. Reinigung der geernteten N-Glycane auf einer TSK-Amid-80-Säule, wenn große Mengen an Detergenzien, nichtflüchtigen Salzen oder Materialien mit freien Aminogruppen vorhanden sind
4. Markierung mit fluoreszierendem 2-Aminobenzamid (2-AB)
5. LC-MS-Analyse markierter N-Glycane
6. Datenanalyse
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