Disulfidbindungen werden manchmal SS-Bindungen oder Disulfidbrücken genannt. Disulfidbrücken beeinflussen die Bioaktivität von Biologika wie Peptiden, Proteinen und Antikörpern.
Yaohai Bio-Pharma bietet Analysedienste für Disulfidbindungen an, die hauptsächlich auf Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS) basieren.
Wir waren an der Proteinstrukturcharakterisierung verschiedener großer Moleküle beteiligt, darunter rekombinante Untereinheitenimpfstoffe, Nanobodies/VHHs/Einzeldomänenantikörper (sdAbs), Antikörperfragmente, Hormone/Peptide, Zytokine, Wachstumsfaktoren (GF), Enzyme, Kollagene usw.
Regulatorische Anforderungen für Disulfidbrücken
Es gibt in verschiedenen Biologika unterschiedliche Zahlen und Ausbildungen von Disulfidbrücken, die bei Proteincharakterisierungsstudien vollständig untersucht werden sollten, wenn die erwartete primäre Aminosäuresequenz des Produkts die Aminosäure Cystein enthält. Dies wird auch im Regulierungsdokument ICH Topic Q6B gefordert.
Analytische Methoden
| Analyse |
Methoden |
| Disulfidbindungen |
Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS) nach Aufschluss |
Um die notwendigen Daten für eine vollständige Bewertung von Disulfidbrücken und freien Thiolen zu erhalten, führen Wissenschaftler von Yaohai Bio-pharma nach der Verdauung mit einer spezifischen Protease eine Peptidkartierung durch. Anschließend wird vor und nach der Reduktion eine Online-LC/Elektrospray-Ionisations-Massenspektrometrie (ES-MS) und/oder LC/ES-MS/MS verwendet.
Yaohai Bio-pharma kann auch den Ellman-Test durchführen, der ein wichtiger Teil der Bewertung jedes vollständig Cystein enthaltenden Produkts ist. Im Rahmen des Ellman-Tests derivatisieren wir Sulfhydryle mithilfe von (5,5'-Dithio-bis-[2-nitrobenzoesäure]). Um den Gehalt an freien Thiolen zu bestimmen, wird das resultierende Produkt mittels UV-Spektrophotometrie bei 412 nm analysiert.
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