Bei rekombinanten Proteinen kommt es häufig zur Oxidation freiliegender Aminosäureseitenketten wie Tryptophan (Trp) und Methionin (Met), wodurch sich die physikochemischen Eigenschaften der Proteine verändern. Diese Veränderungen können wiederum zu Veränderungen der biologischen Funktionen der betroffenen Proteine beitragen, wie etwa Bindungsverlust, Verringerung der enzymatischen Aktivität, unerwartet schnelle Clearance. Proteine sind wichtige Ziele für oxidative Reaktionen, da sie schnell mit Oxidationsmitteln reagieren und in Zellen, extrazellulären Geweben und Körperflüssigkeiten in großen Mengen vorhanden sind.
Daher ist die Überwachung der Proteinoxidation für eine erfolgreiche biopharmazeutische Entwicklung von entscheidender Bedeutung.
Yaohai Bio-Pharma bietet einen Aminosäureoxidationsanalysedienst an, der es Ihnen ermöglicht, die Aminosäureoxidation mittels Flüssigkeitschromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS) zu bestimmen.
Wir waren an der Proteinstrukturcharakterisierung verschiedener großer Moleküle beteiligt, darunter rekombinante Untereinheitenimpfstoffe, Nanobodies/VHHs/Einzeldomänenantikörper (sdAbs), Antikörperfragmente, Hormone/Peptide, Zytokine, Wachstumsfaktoren (GF), Enzyme, Kollagene usw.
Regulatorische Anforderungen für die Aminosäureoxidation
Gemäß den ICH Q6B-Richtlinien können oxidierte Formen durch chromatographische, elektrophoretische und/oder andere relevante Analysemethoden (z. B. Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC), Kapillarelektrophorese, Massenspektroskopie, Zirkulardichroismus) erkannt und charakterisiert werden.
Analytische Methoden
| Analyse |
Methoden |
| Aminosäureoxidation |
LC-MS, Umkehrphasen-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (RP-HPLC) oder Hydrophobe Interaktionschromatographie Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HIC-HPLC) und Massenspektrometrie |
Analytische Verfahren
1. Probenvorbereitung
2. LC-MS
3. Datenanalyse
Tryptophanreste (Trp) sind besonders anfällig für Oxidation, da das aromatische Indol mit reaktiven Sauerstoffspezies sehr reaktiv ist. Die Oxidation von Trp erfordert eine gewisse Freilegung von Trp-Resten, die normalerweise in der dreidimensionalen Struktur des Proteins verborgen sind.
Wenn Trp-Reste jedoch oxidiert werden, können sie sich in eine Vielzahl von Produkten mit sehr unterschiedlichen Eigenschaften vom ursprünglichen Trp verwandeln. Der häufigste Weg für die Trp-Oxidation umfasst die Bildung von N-Formylkinurenin (Massenunterschied: +32).
Eine weitere häufig oxidierte Aminosäure ist Methionin. Das Schwefelatom im Met-Rest kann entweder ein oder zwei Sauerstoffatome aufnehmen, was zur Bildung von Sulfoxid (Massenunterschied: +16) oder Sulfon (Massenunterschied: +32) führt. Diese Modifikation ist aufgrund der typischerweise hohen Oberflächenexposition von Met relativ häufig.
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