Bestimmung des Molekulargewichts durch LC-MS
Das unveränderte Molekülgewicht wird stets als eine wichtige Eigenschaft von Biologika anerkannt. Die Analyse des unveränderten Molekülgewichts dient dazu, Protein/Peptid-Produkte zu demonstrieren und die Biologika zu verifizieren. Das Messen des Molekülgewichts ist eine Anforderung der regulatorischen Vorschriften.
Yaohai Bio-Pharma bietet unter nativen, reduzierten und N-deglycosylierten Bedingungen die Analyse des unveränderten Molekülgewichts an. Wir verwenden Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS), um das unveränderte Molekülgewicht zu bestimmen.
Regulatorische Anforderungen für das Molekülgewicht
Es wird im ICH Q6 empfohlen, dass „das Molekülgewicht (oder Größe) mittels Größenexklusionschromatographie, SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (unter reduzierenden und nicht-reduzierenden Bedingungen), Massenspektrometrie (MS) und anderen geeigneten Techniken bestimmt wird“.
Analytische Methoden
| Analyse |
Methoden |
| Molekülgewicht |
LC-MS / Flüssigchromatographie/Elektrospray-Massenspektrometrie (LC/ES-MS) von nativen, reduzierten, N-Deglykosylierten Proteinen oder Subeinheiten |
Analytische Verfahren
Intakte Molekularmasse:
- Durchführung von LC-MS auf dem nativen Probenmaterial, wie empfangen.
- LC-MS Datenanalyse.
Reduzierte Molekularmasse:
- Behandlung des Proteins mit einem geeigneten Reduktionsmittel;
- Durchführung von LC-MS auf dem reduzierten Protein;
- LC-MS Datenanalyse.
N-Deglykosylierte Molekularmasse:
- Entfernung der N-Glykanstrukturen mit einem geeigneten Enzym;
- Durchführen von LC-MS auf dem N-Deglykosylierten Protein;
- LC-MS Datenanalyse.
Reduziertes und N-Deglykosyliertes Molekülgewicht:
- Behandlung des Proteins mit einem geeigneten Reduktionsmittel;
- Entfernung der N-Glykanstrukturen mit einem geeigneten Enzym;
- Durchführen von LC-MS auf reduziertem und N-deglykosyliertem Protein;
- LC-MS Datenanalyse.
Molekülgewicht des Proteinsubunits:
- Subunit Spaltung
- Durchführen von LC-MS auf Proteinsubunit
- LC-MS Datenanalyse
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