Zauzetost mjesta N-glikozilacije je fiziološka značajka glikoproteina i uglavnom proizvodi N-glikan. Usluga analize popunjenosti mjesta N-glikozilacije tvrtke Yaohai Bio-Pharma provodi se probavom, otpuštanjem, obogaćivanjem i analizom korištenjem tekućinske kromatografije-elektrospray ionizacije masene spektrometrije-masene spektrometrije (LC-ESI-MS/MS).
Sudjelovali smo u strukturnoj karakterizaciji proteina raznih velikih molekula, uključujući rekombinantna podjedinična cjepiva, nanotijela/VHH/protutijela s jednom domenom (sdAbs), fragmente antitijela, hormone/peptide, citokine, faktore rasta (GF), enzime, kolagene, itd.
Regulatorni zahtjevi za zauzetost mjesta N-glikozilacije
Prema smjernicama ICH Q6B, „za glikoproteine se određuje sadržaj ugljikohidrata (neutralni šećeri, amino šećeri i sialne kiseline). Nadalje, struktura lanaca ugljikohidrata, oligosaharidni uzorak (profil antene) i mjesto(a) glikozilacije polipeptidnog lanca analiziraju se u najboljoj mogućoj mjeri.”
Analitička metoda
| Analiza |
Metode |
| Zauzetost mjesta N-glikozilacije |
LC-MS nakon digestije deglikozilazom i proteazama |
Procedure
1. Digestija proteina za stvaranje malih fragmenata peptida.
2. Otpuštanje N-glikana pomoću endoglikozidaze H ili PNGaze F. Endoglikozidaza H cijepa vezu između dva GlcNAc ostatka u jezgri N-povezanih glikana, dok je PNGaza F glikoamidaza koja prekida vezu između GlcNAc i Asn, oslobađajući cijeli šećernog lanca i pretvaranje Asn u Asp s povećanjem mase od 1-Da.
3. Obogaćivanje N-glikopeptida putem HILIC-a (Hidrofilna interakcijska tekućinska kromatografija)
4. Analiza popunjenosti mjesta N-vezane glikozilacije pomoću LC-ESI-MS/MS.
HR
EN
AR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
