Deamidacija bočnih lanaca glutamina i asparagina uobičajena je modifikacija u smislu utjecaja na svojstva proteinskih biofarmaceutika. Deamidacija se može dogoditi u ostacima glutamina, ali obično puno nižom brzinom. Na stope deamidacije utječu temperatura, pH, lokalna struktura proteina i bočni aminoacilni ostaci.
Yaohai BioPharma nudi uslugu testiranja deamidacije aminokiselina, koja vam omogućuje otkrivanje deamidacije aminokiselina pomoću tekućinske kromatografije-masene spektrometrije (LC-MS).
Sudjelovali smo u strukturnoj karakterizaciji proteina raznih velikih molekula, uključujući rekombinantna podjedinična cjepiva, nanotijela/VHH/protutijela s jednom domenom (sdAbs), fragmente antitijela, hormone/peptide, citokine, faktore rasta (CF), enzime, kolagene, itd.
Regulatorni zahtjevi za deamidaciju aminokiselina
Prema smjernicama ICH Q6B, deamidirani oblici mogu se otkriti i karakterizirati kromatografskim, elektroforetskim i/ili drugim relevantnim analitičkim metodama.
Analitičke metode
| Analiza |
Metode |
| Deamidizacija |
Tekuća kromatografija-masena spektrometrija (LC-MS) |
Procedure
npr. asparaginska deamidacija
1. Enzimska probava
2. LC-MS pod uvjetima tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti (HPLC)
3. Analiza podataka
Deamidacija asparagina događa se preko sukcinimidnog intermedijera (Suc), koji je podložan racemizaciji i hidrolizi, dajući četiri Asp izomera, uključujući L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp i D-IsoAsp.
U teoriji, Gln deamidacija može generirati četiri odgovarajuća Glu izomera kroz proces sličan Asn deamidaciji.
Masena spektrometrija visoke rezolucije lako identificira razliku mase od 1 Da između peptida koji sadrže Asn/Gln i njihovih odgovarajućih deamidiranih parnjaka Asp/Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
