Značaj razvoja dolnoprötnog procesa (DSP)
Cijeli fermentacijski broj sadrži ciljni proteин ili plazmid, te i proizvodni i procesualni pristojci, npr. agregati, mikrobiološke ćelijske substarte, Proteini Glavnice (HCP), DNA Glavnice (HCD), endotoksin i antibiotici.
Stoga je ključno dizajnirati učinkovit DSP, proces očišćavanja, kako bi se uklonili određeni pristojci i proizveli vrlo očišćenu i visokokvalitetnu suštancu lijeka. Pored toga, optimizacija procesa očišćavanja može pomoći u povećanju oporavka proizvoda, smanjenju troškova, te poboljšanju skalabilnosti i reprodukcije procesa.
Ključne riječi: razvoj procesa, optimizacija i validacija, proces očišćavanja, hromatografija, eliminacija pristojaca, uklanjanje HCP, eliminacija HCD, uklanjanje endotoksina, denaturiranje i refoldanje proteina, montaža VLP-a, konjugacija
Primjena: Biofarmaceutska industrija, ljudska medicina, veterinarska medicina, cjepivo, rekombinantni veliki molekuli bioloških sredstava, rekombinantna biologija, biološki reagens
Rješenja DSP od Yaohai Bio-Pharma
Imamo obiman iskustvo u izdvajanju ciljnih proteina ili plazmida iz složenih matrica razvijanjem i optimizacijom procesa čišćenja dolje tokom. Postoje različiti tipovi jediničnih operacija koje su prilagođene za čišćenje bioloških sredstava, uključujući centrifugiranje, filtriranje, homogenizaciju, alkalno lišenje, ultrafiltriranje, sedimentacija, denaturation proteina i refolding, hromatografiju itd.
Naše raspoložive usluge razvoja čišćenja uključuju:
- Razvoj cijelog procesa čišćenja od kolekcije stanica ili supernatanta do krajnjeg aktivnog sastojka.
- Optimizacija procesa čišćenja na temelju proizvodnih i proces povezanih onesčućenja kako bi se povećala kvaliteta i sigurnost proizvoda, npr., HCP, HCD, endotoxin.
- Definicija i optimizacija ključnih parametara u jednoj ili više jedinica operacija, uključujući liženje stanica, tangencijalnu točkovnu filtraciju, testiranje čvrstog faza, hromatografiju, denaturation i refolding proteina, itd.
- Optimizacija procesa s obzirom na kvalitetu, dobiv, oporavak, cijenu i skalabilnost.
- Validacija dolnog tokova čišćenja.
- Ocijenjivanje raspona parametara temeljenog na rizicima i dizajn eksperimenata (DoE) u modeliranju procesa.
Detalji usluge
Standardizirane platforme za čišćenje proteina ili plazmida temelje se na više ruđih koraka čišćenja i manje od 4 koraka hromatografije, uključujući uhvaćanje, srednje čišćenje i poliranje.
| Detalji usluge |
Jedinice operacija |
Parametri |
| Ruđe čišćenje |
Centrifugiranje |
Brzina rotacije, vrijeme |
| Visokotlaka homogenizacija |
Ukupni čvrsti sadržaj, tlak, ciklusi |
| Neprekinuto alkalno lišavanje |
Omjer ponovno rasvarenih stanica i rješenja za lišavanje, vrijeme lišavanja |
| Tangencijalna toka filtracije |
Materijal membraane i veličina pora, brzina protoka hranljiva transmembrana (TMP), omjer volumena filtrata i površine membraane |
| Precipitacija |
Tip i koncentracija precipitanta, aditiv, pH, temperatura, vrijeme |
| Denaturation i refolding |
Solubilizacija proteina iz inkluzijskih tijela |
Koncentracija denaturanta (npr., Urea, Guanidine HCl, Jako jonski detergent), Detergentsi (npr., Sodium dodecyl sulfate, SDS), Reducirajući agenti (npr., Dithiothreitol, DTT), Chelatički agenti (Etylenediaminetetraacidska kiselina, EDTA), Temperatura, Vrijeme |
| Prehrana proteina |
Metode prehrane (razbijanje, dijaliza ili SEC prehrana), Koncentracije proteina, Buferi, pH, Temperatura, Vrijeme, Oksidacijski i Redukcijski Agensti (npr., Glutation, GSH/Oksidirani glutation, GSSH, DTT/GSSH, Cistein/Cistin), Male Molekule Dodatke (L-arginine, Ure, Guanidin/HCl, i Čistači) |
| Prikupljanje, Srednja Čišćenja i Poliranje |
AC (Afinijska Hromatografija) |
Nekoliko vrsta hromatografske tvari/stupca (npr., AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Duljina i Promjer Stupca, Sastav Bufera, Injekcijski Obujam, Sastav Mobilne Faze (Ogrtač i Odstranjevanje), pH, Brzina Toka, uvjeti Zagrabljivanja, Pranja i Eluciranja. |
| IEX (Hromatografija Anionskom ili Kationskom Zamjenom) |
| HIC (Hidrofobna Interakcijska Hromatografija) |
| Odstranjivanje soli i/ili veličinska izključiva hromatografija (SEC) |
| RPC (Reverzna Fazna Hromatografija) |
| MMC, Mešovita režim hromatografija |
Studija slučaja
PRIMJER 1
Dobili smo zaduženje da razvijemo i optimiziramo proces daljnjeg očišćavanja kako bismo povećali čistoću proteina s 85% na 90%, istovremeno smanjujući korake u hromatografiji.
Yaohai je dostavio robustan i skalabilan proces očišćavanja s tri koraka hromatografije za ciljni protein, bakterijsku alergiju. Konačna čistoća je dostiglih 95%.
PRIMJER 2
Yaohai je bio odabran od strane našeg klijenta da optimizira proces uklanjanja endotoksinima virusnih liko-particija (VLP) cjepiva.
Naš tim je izvršio optimizaciju parametara hromatografije i pripremio farmaceutske tvari s čistošću od 98% i ostacima endotoksina od 12.8EU/mg.
Naš iskustva
- Bili smo uključeni u razvoj i proizvodnju različitih velikih molekula, uključujući rekombinantne subjedinične cjepive, VLP-e, hormone (insulin, GLP-1, hormon rasta), citochine (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), rastne faktore (EGF, FGF, NGF), nanotijela/jednodomenska tijela (sdAbs), enzime, itd.
Uređaji
Koristimo industrijski vodeće sustave AKTA Pure, AKTA Avant i Preparativni HPLC za izvršavanje različitih hromatografskih metoda, uključujući afinitetnu, ionski razmjenu, hidrofobno djelovanje, obrnutu fazu i hromatografiju po veličini izbjedbe.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
