N-glükaanide profiilide koostamine on biofarmatseutiliste ravimite tootmiseks hädavajalik. Yaohai Bio-Pharma pakub N-glükaani profiilide koostamise teenust, kasutades vabanenud ja märgistatud glükaanide vedelikkromatograafia-massispektromeetriat (LC-MS). N-glükaanide proovi valmistamise üldised etapid hõlmavad glükoproteiini (GP) lõhustamist, deglükosüülimist, puhastamist, märgistamist/derivatiseerimist ja tahkefaasilist ekstraheerimist (SPE).
Oleme osalenud erinevate suurte molekulide, sealhulgas rekombinantsete subühikute vaktsiinide, nanokehade/VHH-de/ ühedomeeniliste antikehade (sdAb), antikehade fragmentide, hormoonide/peptiidide, tsütokiinide, kasvufaktorite (GF), ensüümide, valgu struktuuri iseloomustamises. jne.
Regulatiivsed nõuded N-glükaani profileerimisele
Vastavalt ICH Q6B juhistele "määratakse glükoproteiinide puhul süsivesikute sisaldus (neutraalsed suhkrud, aminosuhkrud ja siaalhapped). Lisaks analüüsitakse nii palju kui võimalik süsivesikute ahelate struktuuri, oligosahhariidide mustrit (antennaarne profiil) ja polüpeptiidahela glükosüülimiskohta.
Analüütiline meetod
| analüüs |
Meetodid |
| N-glükaani profileerimine |
Vabanenud ja märgistatud glükaanide vedelikkromatograafia-massispektromeetria (LC-MS) analüüs |
Protseduurid
1. Ensümaatiline glükaani vabastamine peptiid-N-glükosidaas F-ga (PNGaas F)
2. Vabanenud glükaanide derivatiseerimine 2-aminobensamiidiga (2-AB)
3. Kogutud N-glükaanide puhastamine kolonnis TSK Amide – 80, kui esineb suur kogus detergente, mittelenduvaid sooli või vabade aminorühmadega materjale.
4. Märgistamine fluorestseeruva 2-aminobensamiidiga (2-AB)
5. Märgistatud N-glükaanide LC-MS analüüs
6. Andmete analüüs
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
