Protsessi edasiarendus

Mikroobne CDMO

Allavoolu protsessi (DSP) arendamise tähtsus

Kogu fermentatsioonipuljong sisaldab sihtvalku või plasmiidi, aga ka toote ja protsessiga seotud lisandeid, nt agregaate, mikroobse raku substraate, peremeesraku valke (HCP), peremeesraku DNA-d (HCD), endotoksiini ja antibiootikume.

Seetõttu on ülioluline välja töötada tõhus DSP, puhastusprotsess, et eemaldada teatud lisandid ning toota kõrgelt puhastatud ja kvaliteetset ravimainet. Lisaks võib puhastusprotsessi optimeerimine aidata suurendada toote taaskasutamist, vähendada kulusid ning parandada protsessi mastaapsust ja reprodutseeritavust.

Märksõnad: protsessi arendamine, optimeerimine ja valideerimine, puhastusprotsess, kromatograafia, lisandite eemaldamine, HCP eemaldamine, HCD eliminatsioon, endotoksiinide eemaldamine, valgu denatureerimine ja voltimine, VLP kokkupanek, konjugatsioon

Kasutusala: biofarmatseutiline tööstus, inimmeditsiin, loomameditsiin, vaktsiin, rekombinantsed suure molekuliga bioloogilised ained, rekombinantsed bioloogilised ained, bioloogiline reaktiiv

Yaohai Bio-Pharma DSP lahendused

Meil on ulatuslik kogemus sihtvalkude või plasmiidide eraldamisel keerukatest maatriksitest, arendades ja optimeerides allavoolu puhastusprotsessi. Bioloogiliste ainete puhastamiseks sobivad erinevat tüüpi ühikoperatsioonid, sealhulgas tsentrifuugimine, filtreerimine, homogeniseerimine, aluseline lüüs, ultrafiltreerimine, sadestamine, valgu denatureerimine ja voltimine, kromatograafia jne.

Meie saadaolevad puhastusarendusteenused hõlmavad järgmist:

Kogu puhastusprotsessi arendamine alates rakkude või supernatandi kogumisest kuni lõpliku toimeaineni.
Puhastusprotsessi optimeerimine toote ja protsessiga seotud lisandite põhjal, et tõsta toote kvaliteeti ja ohutust, nt HCP, HCD, endotoksiin.
Põhiparameetrite määratlemine ja optimeerimine ühes või mitmes üksuses, sealhulgas rakulüüsis, tangentsiaalse voolu filtreerimises, vaigu sõelumises, kromatograafias, valgu denatureerimises ja ümbervoltimises jne.
Protsessi optimeerimine kvaliteedi, saagise, taaskasutamise, kulude ja mastaapsuse osas.
Järelvoolu puhastusprotsessi valideerimine.
Riskipõhine parameetrivahemiku hindamine ja katsete kavandamine (DoE) protsesside modelleerimisel.

Teenuse üksikasjad

Standardiseeritud valgu või plasmiidi puhastamise platvormid põhinevad mitmel töötlemata puhastamisetapil ja vähem kui neljal kromatograafiaetapil, sealhulgas püüdmisel, vahepealsel puhastamisel ja poleerimisel.

Teenuse üksikasjad	Üksuse toimingud	parameetrid
Toorpuhastus	Tsentrifuugimine	Pöörlemiskiirus, aeg
	Kõrgsurve homogeniseerimine	Tahke kogusisaldus, rõhk, tsüklid
	Pidev leeliseline lüüs	Resuspendeeritud rakkude ja lüüsilahuse suhe, lüüsiaeg
	Tangentsiaalse voolu filtreerimine	Membraani materjal ja pooride suurus, etteande voolukiirus transmembraanne rõhk (TMP), filtrimahu ja membraani pindala suhe
	Sademed	Sademe tüüp ja kontsentratsioon, lisand, pH, temperatuur, aeg
Denatureerimine ja ümbervoltimine	Inklusioonkeha valkude solubiliseerimine	Denatureerivate ainete kontsentratsioon (nt uurea, guanidiini HCl, tugev ioonne detergent), pesuained (nt naatriumdodetsüülsulfaat, SDS), redutseerivad ained (nt ditiotreitool, DTT), kelaativad ained (etüleendiamiintetraäädikhape, EDTA), temperatuur, aeg
Denatureerimine ja ümbervoltimine	Valkude ümbervoltimine	Ümbervoltimise meetodid (lahjendus, dialüüs või SEC-i ümbervoltimine), valgu kontsentratsioonid, puhvrid, pH, temperatuur, aeg, oksüdeerivad ja redutseerivad ained (nt glutatioon, GSH/oksüdeeritud glutatioon, GSSH, DTT/GSSH, tsüsteiin/tsüstiin), väikesed molekulilisandid (L-arginiin, uurea, guanidiin/HCl ja pesuained)
Püüdmine, vahepealne puhastamine ja poleerimine	AC (afiinsuskromatograafia)	Mitut tüüpi kromatograafiavaiku/kolonni (nt AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), kolonni pikkus ja läbimõõt, puhvri koostis, süstimise maht, liikuva faasi koostis (adsorptsioon ja desorptsioon), pH, voolukiirus, sidumine, Pesemis- ja elueerimistingimused.
	IEX (anioon- või katioonvahetuskromatograafia)
	HIC (hüdrofoobse interaktsiooni kromatograafia)
	Soola eemaldamise ja/või suuruseralduskromatograafia (SEC)
	RPC (pöördfaasi kromatograafia)
	MMC, segarežiimi kromatograafia

Juhtumiuuring

Kohtuasi 1

Meil on ülesandeks arendada ja optimeerida allavoolu puhastusprotsess, et suurendada valgu puhtust 85%-lt 90%-le, vähendades samal ajal kromatograafia etappe.

Yaohai tegi sihtvalgu, bakteriaalse allergia jaoks tugeva ja skaleeritava puhastusprotsessi kolmeastmelise kromatograafiaga. Ja lõplik puhtus saavutas 3%.

Kohtuasi 2

Meie klient määras Yaohai viiruselaadse osakese (VLP) vaktsiini endotoksiinide eemaldamise protsessi optimeerimiseks.

Meie meeskond viis läbi kromatograafia parameetrite optimeerimise ja valmistas ravimaine puhtusega 98% ja endotoksiini jäägiga 12.8 EU/mg.

Meie kogemused

Oleme osalenud erinevate suurte molekulide, sealhulgas rekombinantsete subühikute vaktsiinide, VLP-de, hormoonide (insuliin, GLP-1, kasvuhormoon), tsütokiinide (Interleukiin-2/IL-2, IL-15, IL-21) väljatöötamises ja valmistamises. ), kasvufaktorid (EGF, FGF, NGF), nanokehad/ühedomeenilised antikehad (sdAb), ensüümid jne.

Tarvikud

Kasutame tööstusharu juhtivaid AKTA Pure, AKTA Avant ja Preparative HPLC süsteeme erinevate kromatograafiameetodite, sealhulgas afiinsus-, ioonivahetus-, hüdrofoobse interaktsiooni, pöördfaasi- ja suuruseralduskromatograafia teostamiseks.

kõik kategooriad

Protsessi edasiarendus

Mikroobne CDMO