Glutamiini ja asparagiini külgahelate deamideerimine on valgu biofarmatseutiliste preparaatide omadustele avalduva mõju seisukohast tavaline modifikatsioon. Deamidatsioon võib toimuda glutamiinijääkides, kuid tavaliselt palju väiksema kiirusega. Deamiidimise kiirust mõjutavad temperatuur, pH, lokaalne valgu struktuur ja külgnevad aminoatsüüljäägid.
Yaohai BioPharma pakub aminohapete deamidatsiooni testimise teenust, mis võimaldab tuvastada aminohapete deamiidimist vedelikkromatograafia-massispektromeetria (LC-MS) abil.
Oleme osalenud mitmesuguste suurte molekulide, sealhulgas rekombinantsete subühikute vaktsiinide, nanokehade/VHH-de/ ühedomeeniliste antikehade (sdAb), antikehade fragmentide, hormoonide/peptiidide, tsütokiinide, kasvufaktorite (CF), ensüümide, valgu struktuuri iseloomustamises. jne.
Aminohapete desamidatsiooni reguleerivad nõuded
Vastavalt ICH Q6B juhistele saab deamideeritud vorme tuvastada ja iseloomustada kromatograafiliste, elektroforeetiliste ja/või muude asjakohaste analüütiliste meetoditega.
Analüütilised meetodid
| Analüüs |
Meetodid |
| Deamidatsioon |
Vedelikkromatograafia-massispektromeetria (LC-MS) |
Protseduurid
nt asparagiinhappe desamideerimine
1. Ensümaatiline seedimine
2. LC-MS kõrgefektiivse vedelikkromatograafia (HPLC) tingimustes
3. Andmete analüüs
Asparagiini deamideerimine toimub suktsiinimiidi vaheühendi (Suc) kaudu, mis on vastuvõtlik ratsemiseerumisele ja hüdrolüüsile, saades neli Asp isomeeri, sealhulgas L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp ja D-IsoAsp.
Teoreetiliselt võib Gln-deamideerimine tekitada neli vastavat Glu-isomeeri Asn-deamideerimisega sarnase protsessi kaudu.
Kõrge lahutusvõimega massispektromeetria tuvastab kergesti 1-Da massierinevuse Asn/Gln-i sisaldavate peptiidide ja nende vastavate deamiiditud vastete Asp/Glu vahel.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
