Ülemise protsessi arenduse tähtsus
Ülemine protsess (USP), mida nimetatakse ka fermantatsiooniprotsessiks, on üks esialgseid faaseid bioprotsesside ülemises osas. Mikrobfermantatsiooniprotsess on oluline kõrge tihe rakkukultuuri ja välismaiste geeni ekspresseerimiseks, mis mõjutab otsest bioloogiliste ainetega toodangut ja maksumust.
Bioloogiliste ainete arendamise varases etapis (e-kliiniline või faas 1/2) keskendutakse skaleeritavate loomaaegsete protsesside arendamisele keskmise tootluskaupa ja kõigi toote kvaliteedistandardite vastuvõtmisele.
Hilisemates etappides (faas 3 või kaubanduslikult) keskendutakse tootluskaupale, tugevusele, skaleeritavusele ja taastatavusele, luues kuluefektiivse protsessi. Need küsimused lahendatakse protsessi karakteristikate ja protessi valideerimise uurimuste abil. Samal ajal rakendatakse tavaliselt tööriistu nagu kvaliteet kaudselt (QbD) ja eksperimentide disain (DoE).
Võtmesõnad: protsessi arendamine, optimeerimine ja valideerimine, fermentatsiooniprotsess, mikrobsete keetega fermentatsioon, bakteeriumide fermentatsioon, jeesdi fermentatsioon, kõrge tihtsusega fermentatsioon, geneeritud liigi fermentatsioon
Rakendus: biotehnoloogiline farmaatsia, inimravi, loomaravi, vaktsiinid, rekombinantne suur molekul bioainete, rekombinantne bioained, bioloogiline reageendi
Yaohai Bio-Pharma USP lahendused
Tööta üle 10-aastase mikrobiidfermentatsiooni kogemusest, Yaohai Bio-Pharmal on oskusi aidata lahendada fermentatsiooniprotsessi väljakutseid. Me võime kiiresti ellu viia kõrge tihtsusega fermentatsioonistrateegiad Escherichia coli (E. coli) periplaasmiljoni sekretseerimine, sellelises ratsionäärne või inklusiivkoormus ekspresjon ning jeesi välis- või siseekspresjon.
Meie saadaval olevad üldised fermentatsiooniarendus teenused hõlmavad:
- Fermentatsiooniprotsessi disain small scale'i 7L toimumisel toite režiimis
- Kolme pakkumise protsessi valideerimine 7L fermentaatides
- Vahetasandiline protsess suurendatakse 30L/70L ulatuseni
Me võime弹性地 teostada mitmeparametrilist optimeerimist, et saavutada soovitud tootlus või suhe, kasutades ühekordset tegurit (OTAF) või eksperimentide plaanimise meetodit (DoE).
Peamised fermantimisparameetrid on järgnevad:
Elusloomade vabast fermantimismeedia koostis
Antibiootikate puudumine või olemasolu, algkultuuri maht
Kasvuhetkeline temperatuur, pH, lahustatud hapniku (DO) tase
Toitumisrežiim (nt toidukokku)
Indutsija kogus (nt IPTG, metanol), indutsijapunkt (raakude miskaugus/OD600)
Indutsijatemperatuur, indutsijaaeg
jne.
Teenuste üksikasjad
| Teenused |
Protsessivoog |
| Kasvatus Shake Flaskis (500 mL) |
Loomavabase meediumi ettevalmistamine → Mikrobsete kasvatamine → Kasvatus kinnistusmasinas → Indigeerimine → Kogumine |
| Kasvatus fermenteris (7 L) |
Loomavabase meediumi ettevalmistamine → Mikrobsete kasvatamine → Kõrghustkusest rakukasvatus 7L bioreaktoris → Indigeerimine → Kogumine |
| Proteiinide/Peptiidide kvaliteedikontroll |
Eeltoitlus Sisemine ratsutava väljenduse: Mikrobsete rakkude kogumine ja uuesti suspenderdamine → Ultrasoolline murdmine → Rakuülejääkide eemaldamine → Algne ekstrakt Inklusiivkoore väljendus: Mikrobsete rakkude kogumine ja uuesti suspenderdamine → Ultrasoolline murdmine → Inklusiivkoore ettevalmistamine → Algne ekstrakt Välisratsutava väljenduse: Kultuuri ülemine kuju kogumine → Konsentratsioon ja puhvervahetamine → Algne ekstrakt Kvaliteedi analüüs: Algne ekstrakt nagu näidis → Sihtmolekulide analüüs SDS PAGE või lääneplokiga (WB) |
| Plasmiidide kvaliteedikontroll |
Eeltoitmine ja kvaliteedi analüüs Plasmidi ekstraktioon → DNA analüüs agaroodse geleelektrofoorees |
Praktikunne
Meie klient üleskutseb meid suurendama sihtpolüpeptiidhormooni tootmist 8 g/L-st 10 g/L-ni.
Põhjaliku tegurimatriksi ja vastuspinnakujunduse abil tööriistades DoE kiiresti tuvastasime ja optimeerisime võtmefermentatsiooniparameetrid. Optimeeritud kõrge rakkude tihega fermentatsiooniprotsessiga suurenes ekspresiooniniiv 10 g/L-ni.
Meie kogemused
- Oleme töötanud erinevate mikrobsete isikupäradega, näiteks E.Coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink strain1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) ja Hansenula polymorpha (H. polymorpha) .
- Meil on kogemus E. coli periplaasmilise sekretatsiooniga, ratsionaalse ja inklusiivse keha ekspresiooniga ning ka küüslaste sisemisega või välisemisega ekspresiooniga. Inklusiivse keha tootmine ulatub kuni 10g/L, samas kui ratsionaalsete proteiinide tootmine muutub vahemikus 0,5 kuni 15g/L.
- Oleme osalenud erinevate suurte molekulite arendamises ja tootmisel, sealhulgas rekombinantsetes subuunit vaciinides, viirusepuude partikelites (VLP), hormoonides (insuliin, GLP-1, kasvuhormoon), sitokiinides (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), kasvufaktorites (EGF, FGF, NGF), nanokehades/ ühedomaantikehades (sdAbs), enzyymi jms.
- Seade
7L*16 Fermentatsioonisüsteem
Cedex Bio Analüsaator, Bioprotsessianalüsaator
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
