Rekombinantsete proteiinide puhul ilmneb sageli avastatud aminohapenikülgsete, nagu tryptofaan (Trp) ja meetioonin (Met), oksidatsiooni, mis muudab proteiinide füüsika-kemilisi omadusi. Need muutused võivad omakorda kaasa aidata mõjutatud proteiinide bioloogiliste funktsioonide muutmisele, näiteks sidumise kadumine, enzyymi tegevuse vähendamine, ootamatult kiire likveerimine. Proteiinid on olulised eesmärgid oksidatiivsetele reaktsioonidele, kuna need reageerivad kiiresti oksidantidega ja neid on palju rakudes, ekstraselluaarsetes kudestes ja kehavededes.
Seega on proteiinioksidaatsiooni jälgimine kriitiline edukaks biofarmatseutilise arendamiseks.
Yaohai Bio-Pharma pakub aminohapenioksidaatsioonianalüüsi teenust, mis võimaldab teil kindlaks teha aminohapenioksidaatsiooni vedelikuromaatograafia-massi-spektromeetriaga (LC-MS).
Oleme osalenud erinevate suurte molekulide proteiinistruktuuri iseloomustamises, sealhulgas rekombinantsete subüüni vaktsiinide, nanokehade / VHH-de / ühemõõtmeliste antikehade (sdAbs), antikeha fragmentide, hormoonide / peptiidide, sitokiinide, kasvufaktorite (GF), enzyymide, kollageenide jms karakteriseerimises.
Reguleerivad nõuded aminohapetiteoksüdatsioonile
ICH Q6B juhendite kohaselt võib oksüdeeritud vorme tuvastada ja iseloomustada kromaatograafiliste, elektroforeetiliste ja/või teiste seotud analüütiliste meetodite abil (nt Ülimalt Täpne Võskekaaslusseerumine (HPLC), kapillaareelektroforees, massispektromeetria, ringne dihkroism).
Analüütilised meetodid
| Analüüs |
Meetodid |
| Aminohapete oksidatsioon |
LC-MS, vastupoolse fasa HPLC (RP-HPLC) või hüdrofoobse interaktsiooni kromaatograafia HPLC (HIC-HPLC) ning massispektromeetria |
Analüütilised protseduudid
1. Proovi ettevalmistamine
2. LC-MS
3. Andmeanalüüs
Tryptofaani (Trp) restid on eriti kõvasti oksigeenile altsetud, kuna aromaatse indooli rühma reageerib tugevalt reaktiivsetega hapnikuga spetsidega. Trp oksidatsioon nõuab mõnda Trp restide altsetust, mis on tavaliselt peidetud proteiidi kolmemõõtmelises struktuuris.
Kuid kui Trp restid oksidgeeruvad, võivad need muutuda mitmesugustesse toodetes, mis on väga erinevad algsest Trp-st. Kõige levinum tee Trp oksidatsioonile hõlmab N-foramilkinureeni vormimist (Massi erinevus: +32).
Teine levinum oksidgeeritav aminohape on metioniin. Metioniini resti sulfuuri atom võtab vastu kas ühe või kahe hapniku atomi, mis viib sulfoxiidi (Massi erinevus: +16) või sulfooni (Massi erinevus: +32) vormimiseni, vastavalt. See muutus on suhtelisti levinud pärast Met-i tipult altsetust.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
