ستوفر بيانات خريطة الببتيد المستندة إلى الكروماتوغرافيا السائلة - الطيفية الكتلة (LC-MS) كمية كبيرة من المعلومات حول البنية الأولية والبنية الأعلى للبروتينات الطبيعية والمُعاد تشكيلها، بما في ذلك تغطية سلسلة الحمض الأميني، التعديلات ما بعد الترجمة (PTMs، على سبيل المثال: السكرنة، الأكسدة، الإديميتاز)، الروابط ثنائي الكبريتيد، وما إلى ذلك.
تقدم ياوهاي بايو فارما خدمات تحليل خريطة الببتيد لبروتينك المستهدف باستخدام LC-MS، لتسريع أبحاثك حول بنية البروتين.
قد شاركنا في تحديد بنية البروتينات لجزيئات كبيرة متنوعة، بما في ذلك لقاحات الوحدة المُعاد تشكيلها، النانوباديز / VHHs / الأجسام المضادة ذات المجال الواحد (sdAbs)، شظايا الأجسام المضادة، الهرمونات / الببتيدات، السيتوكينات، عوامل النمو (GF)، الإنزيمات، الكولاجينات، وما إلى ذلك.
المتطلبات التنظيمية لخريطة الببتيد
توصي إرشادات ICHQ6B، "يتم تنفيذ تحلل المنتج إلى ببتيدات منفصلة باستخدام الإنزيمات أو المواد الكيميائية المناسبة، ويتم تحليل الشظايا الببتيدية الناتجة باستخدام HPLC أو إجراء تحليلي آخر مناسب. يجب تحديد شظايا الببتيدات قدر الإمكان باستخدام تقنيات مثل تحليل التركيب الأميني، أو تسلسل الطرف N، أو الطيف الكتلي (MS). خريطة الببتيد للمادة الفعالة أو منتج الدواء (DP) باستخدام طريقة تم التحقق منها بشكل مناسب هي طريقة تُستخدم غالبًا لتأكيد بنية المنتج المطلوب لإطلاق الدفعة."
طرق تحليلية
| تحليل |
طرق |
| رسم خريطة الببتيد |
هضم البروتين بواسطة البروتياز وكروماتوغرافيا السائل-الطيف الكتلي (LC-MS) |
الإجراء التحليلي
1. التخفيض والتثبيت
الغرض هو تقليل الجسور⼆ sulfide وحجب الثيول الحر الناتج. تقليل جسور disulfide يساعد على فتح بنية البروتين مما يجعل هضم البروتين بالأنزيمات أكثر كفاءة. هذه الخطوة ستكسر أيضًا الجسور بين السلاسل في حالة البروتينات متعددة السلاسل التي تحتوي على جسور disulfide تربط بين السلاسل (على سبيل المثال، الأجسام المضادة أحادية النسخة، mAbs).
2. هضم البروتين باستخدام الإنزيمات
الغرض هو تحلل البروتين إلى الببتيدات. نحن نختار الإنزيمات بناءً على التسلسل النظري للبروتين ومعرفتنا بهضم البروتين بواسطة الإنزيمات. اختيار الإنزيمات بهذه الطريقة يجب أن يؤدي إلى أفضل تحليل لخرائط الببتيدات.
3. تحليل الببتيدات المهضومة باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة ذات الأداء العالي بالمرحلة العكسية مع الكشف بالموجات فوق البنفسجية (UV) والكشف بمساكن الكتلة الرش الكهربائي (LC/ES-MS).
فصل الببتيدات بناءً على القطب باستخدام LC (الكروماتوغرافيا السائلة بالمرحلة العكسية)
عندما ينفصل الببتيد عن عمود LC، سينتج الطيف الكتلي معلومات الكتلة مع معلومات أيونات الشظايا، مما يسمح لنا بتحديد معلومات التسلسل. نستخدم معلومات التسلسل لتأكيد هوية الببتيد وتقديم المعلومات الأولية.
يمكننا أيضًا توليد معلومات الشظايا من الببتيدات أثناء دخولها إلى مصدر الطيف الكتلي من عمود LC. بناءً على متطلبات الدراسة، يكون هذا إما LC-MS/MS انتقائي أو غير انتقائي، والذي يمكن اعتباره شكلًا من أشكال MS المتتابع.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
