ستوفر بيانات رسم خرائط الببتيد المستندة إلى التحليل اللوني السائل - قياس الطيف الكتلي (LC-MS) كمية كبيرة من المعلومات حول بنية الترتيب الأولي والأعلى للبروتينات الأصلية والمؤتلفة، بما في ذلك تغطية تسلسل الأحماض الأمينية، وتعديلات ما بعد الترجمة (PTMs، على سبيل المثال، الغليكوزيل ، الأكسدة، إزالة الأميد)، روابط ثاني كبريتيد، الخ.
تقدم Yaohai Bio-Pharma خدمات تحليل رسم خرائط الببتيد للبروتين المستهدف بواسطة LC-MS، لتسريع بحثك حول بنية البروتين.
لقد شاركنا في التوصيف الهيكلي للبروتين لمختلف الجزيئات الكبيرة، بما في ذلك لقاحات الوحدات الفرعية المؤتلفة، والأجسام النانوية/VHHs/الأجسام المضادة أحادية المجال (sdAbs)، وشظايا الأجسام المضادة، والهرمونات/الببتيدات، والسيتوكينات، وعوامل النمو (GF)، والإنزيمات، والكولاجينات، إلخ.
المتطلبات التنظيمية لرسم خرائط الببتيد
توصي إرشادات ICHQ6B بما يلي: "يتم إجراء التجزئة الانتقائية للمنتج إلى ببتيدات منفصلة باستخدام إنزيمات أو مواد كيميائية مناسبة ويتم تحليل شظايا الببتيد الناتجة بواسطة HPLC أو أي إجراء تحليلي مناسب آخر. وينبغي تحديد شظايا الببتيد إلى أقصى حد ممكن باستخدام تقنيات مثل تحليل تكوين الأحماض الأمينية، أو تسلسل الطرف N أو قياس الطيف الكتلي (MS). إن رسم خرائط الببتيد للمادة الفعالة أو المنتج الدوائي (DP) باستخدام طريقة تم التحقق من صحتها بشكل مناسب هو أسلوب يستخدم غالبًا لتأكيد بنية المنتج المرغوب فيه لإطلاق الدفعة.
طرق تحليلية
| تحليل الأداء |
طرق |
| رسم خرائط الببتيد |
هضم الأنزيم البروتيني واللوني السائل-قياس الطيف الكتلي (LC-MS) |
الإجراء التحليلي
1. التخفيض والألكلة
والغرض من ذلك هو تقليل جسور ثاني كبريتيد ومنع الثيول الحر المتولد. يساعد تقليل جسور ثاني كبريتيد على فتح بنية البروتين مما يجعل عملية الهضم المحلل للبروتين أكثر كفاءة. ستؤدي هذه الخطوة أيضًا إلى كسر الجسور بين السلاسل في حالة البروتينات متعددة السلاسل التي تحتوي على جسور ثاني كبريتيد تربط السلاسل (مثل الأجسام المضادة وحيدة النسيلة، mAbs).
2. هضم البروتين باستخدام الإنزيمات
والغرض من ذلك هو تحطيم البروتين إلى الببتيدات. لقد اخترنا الإنزيمات على أساس التسلسل النظري للبروتين ومعرفة الهضم النظري للبروتين بواسطة الإنزيمات. اختيار الإنزيمات بهذه الطريقة، يجب أن يؤدي إلى أفضل تحليل لرسم خرائط الببتيد.
3. تحليل الببتيدات المهضومة استخدام تحليل كروماتوغرافي سائل عالي الأداء للمرحلة العكسية عبر الإنترنت باستخدام الأشعة فوق البنفسجية (UV) والكشف الطيفي للكتلة الكهربائية (LC/ES-MS).
فصل الببتيد على أساس القطبية باستخدام LC (الطور العكسي-LC)
عندما يتم إزالة الببتيد من عمود LC، سيقوم مطياف الكتلة بتوليد معلومات جماعية مع معلومات أيون الجزء، مما يسمح لنا بتحديد معلومات التسلسل. نستخدم معلومات التسلسل لتأكيد هوية الببتيد وتقديم المعلومات الأولية.
يمكننا أيضًا إنشاء معلومات التجزئة من الببتيدات عند دخولها إلى مصدر مطياف الكتلة من عمود LC. اعتمادًا على متطلبات الدراسة، يكون هذا إما LC-MS/MS انتقائيًا أو غير انتقائي، والذي يمكن اعتباره شكلاً من أشكال مرض التصلب العصبي المتعدد الترادفي.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
لا
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
