احتلال موقع N-جليكوزيلات هو ميزة فيزيولوجية لبروتينات الجليكوز وينتج بشكل أساسي N-جليكان. يتم تقديم خدمة تحليل احتلال موقع N-جليكوزيلات من قبل يوهاي بيو-فارما من خلال الهضم، الإطلاق، التخصيب والتحليل باستخدام كروماتوجرافيا السائل ذات الطور العالي - طيف الكتلة بالرش الكهربائي (LC-ESI-MS/MS).
قد شاركنا في تحديد بنية البروتينات لجزيئات كبيرة متنوعة، بما في ذلك لقاحات الوحدة المُعاد تشكيلها، النانوباديز / VHHs / الأجسام المضادة ذات المجال الواحد (sdAbs)، شظايا الأجسام المضادة، الهرمونات / الببتيدات، السيتوكينات، عوامل النمو (GF)، الإنزيمات، الكولاجينات، وما إلى ذلك.
المتطلبات التنظيمية لاحتلال موقع N-جليكوزيلات
وفقًا لإرشادات ICH Q6B، "بالنسبة للبروتينات السكرية، يتم تحديد محتوى الكربوهيدرات (السكريات المحايدة، السكريات الأمينية، وأحماض السياليك). بالإضافة إلى ذلك، يتم تحليل بنية سلاسل الكربوهيدرات، وأنماط الزيتوكاريد (ملف الأنتين)، ومواقع الجليكوزيلات في سلسلة الببتيد متى أمكن ذلك."
الطريقة التحليلية
| تحليل |
طرق |
| نسبة احتلال موقع التعديل السكري N-glycosylation |
LC-MS بعد هضم بواسطة إنزيمات إزالة الجليكوز وبروتياز |
إجراءات
1. هضم البروتينات لتكوين شظايا ببتيد صغيرة.
2. إطلاق N-غليكاني باستخدام إنزيم endoglycosidase H أو PNGase F. يكسر إنزيم endoglycosidase H الرابطة بين جزيئي GlcNAc في نواة الغليكاني المرتبط N، بينما PNGase F هو غليكوأميداز الذي يقطع الرابطة بين GlcNAc وAsn، مما يؤدي إلى تحرر السلسلة السكرية بأكملها وتحويل Asn إلى Asp مع زيادة كتلتها بمقدار 1 دالتون.
3. تخصيب N-غليكوببتيد عبر HILIC (كروماتوجرافيا السائلة بالتفاعل الهيدروفيلى)
4. تحليل احتلال مواقع الجليكوسيلات المرتبطة N باستخدام LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
