غالبًا ما تشهد البروتينات المُعاد تركيبها أكسدة للأجزاء الجانبية للأحماض الأمينية المكشوفة، مثل التربتوفان (Trp) والميثيونين (Met)، مما يتسبب في تغيير الخصائص الفيزيائية والكيميائية للبروتينات. قد تؤدي هذه التغيرات بدورها إلى تعديل الوظائف البيولوجية للبروتينات المتضررة، مثل فقدان الارتباط، تقليل النشاط الإنزيمي، أو التخلص السريع وغير المتوقع. تعتبر البروتينات أهدافًا مهمة لتفاعلات الأكسدة لأنها تتفاعل بسرعة مع المواد المؤكسدة وتشكل نسبة كبيرة من الخلايا والأنسجة خارج الخلية والسائل الجسماني.
لذلك، فإن مراقبة أكسدة البروتينات أمر حاسم لتطوير الأدوية الحيوية بنجاح.
تقدم شركة يوهاي بايو-فارما خدمة تحليل أكسدة الأحماض الأمينية، والتي تمكنك من تحديد أكسدة الأحماض الأمينية باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة - الطيف الكتلي (LC-MS).
لقد شاركنا في تحديد بنية البروتينات لجزيئات كبيرة متنوعة، بما في ذلك لقاحات الوحدة المركبة (Recombinant Subunit Vaccines)، النانوأجسام / VHHs / الأجسام المضادة ذات المجال الواحد (sdAbs)، شظايا الأجسام المضادة، الهرمونات/الببتيدات، السيتوكينات، عوامل النمو (GF)، الإنزيمات، الكولاجينات، وما إلى ذلك.
المتطلبات التنظيمية لأكسدة الأحماض الأمينية
وفقًا لإرشادات ICH Q6B، يمكن اكتشاف وتحديد الأشكال المؤكسدة باستخدام طرق تحليلية كروماتوجرافية، كهربائيّة أو غيرها من الأساليب ذات الصلة (على سبيل المثال، الكروماتوجرافيّة السائلة عالية الأداء (HPLC)، الكهربائيّة الرقيقة، الطيف الكتلي، ثنائيّة الانحناء الدائري).
طرق تحليلية
| تحليل |
طرق |
| أكسدة الأحماض الأمينية |
LC-MS، كروماتوجرافيّة السائل العكسي عالية الأداء (RP-HPLC) أو كروماتوجرافيّة التفاعل الهيدروفوبي عالية الأداء (HIC-HPLC) والطيف الكتلي |
إجراءات التحليل
1. إعداد العينة
2. LC-MS
3. تحليل البيانات
تعرض مكونات التربتوфан (Trp) بشكل خاص للتأكسد بسبب التفاعل العالي للحلقة العطرية الإندول مع أنواع الأكسجين النشطة. يتطلب تأكسد مكونات التربتوغان بعض التعرض لمكونات التربتوغان التي تكون عادة مدفونة في البنية ثلاثية الأبعاد للبروتين.
ومع ذلك، عندما تتعرض مكونات التربتوغان للتأكسد، يمكنها أن تتحول إلى مجموعة متنوعة من المنتجات ذات الخصائص المختلفة تمامًا عن التربتوغان الأصلي. أكثر المسارات شيوعًا لتأكسد التربتوغان يتضمن تكوين N-فورميلكينورينين (فرق الكتلة: +32).
الأحماض الأمينية الأخرى التي تتعرض للتأكسد بشكل شائع هي الميثيونين. يمكن للذرة الكبريت في مكون الميثيونين أن تقبل ذرة أكسجين واحدة أو اثنتين مما يؤدي إلى تكوين السلفوكسيد (فرق الكتلة: +16) أو السلفون (فرق الكتلة: +32)، حسب كل حالة. تعد هذه التعديلات نسبيًا شائعة بسبب التعرض العالي عادةً لمكون الميثيونين على السطح.
AR
EN
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
