غالبًا ما تشهد البروتينات المؤتلفة أكسدة السلاسل الجانبية للأحماض الأمينية المكشوفة، مثل التربتوفان (Trp) والميثيونين (Met)، مما يؤدي إلى تغيير الخواص الفيزيائية والكيميائية للبروتينات. قد تساهم هذه التغييرات بدورها في تغيير الوظائف البيولوجية للبروتينات المصابة، مثل فقدان الارتباط، وتقليل النشاط الأنزيمي، والتصفية السريعة بشكل غير متوقع. تعتبر البروتينات أهدافًا مهمة للتفاعلات المؤكسدة لأنها تتفاعل بسرعة مع المواد المؤكسدة وتتواجد بكثرة في الخلايا والأنسجة خارج الخلية وسوائل الجسم.
ولذلك، مراقبة أكسدة البروتين أمر بالغ الأهمية لنجاح تطوير المستحضرات الصيدلانية الحيوية.
تقدم شركة Yaohai Bio-Pharma خدمة تحليل أكسدة الأحماض الأمينية، والتي تسمح لك بتحديد أكسدة الأحماض الأمينية عن طريق التحليل الكروماتوغرافي السائل - قياس الطيف الكتلي (LC-MS).
لقد شاركنا في التوصيف الهيكلي للبروتين لمختلف الجزيئات الكبيرة، بما في ذلك لقاحات الوحدات الفرعية المؤتلفة، والأجسام النانوية/ VHHs/ الأجسام المضادة أحادية المجال (sdAbs)، وشظايا الأجسام المضادة، والهرمونات/الببتيدات، والسيتوكينات، وعوامل النمو (GF)، والإنزيمات، والكولاجينات، إلخ.
المتطلبات التنظيمية لأكسدة الأحماض الأمينية
وفقًا لإرشادات ICH Q6B، قد يتم اكتشاف الأشكال المؤكسدة وتمييزها بواسطة طرق تحليلية كروماتوغرافية و/أو كهربية و/أو طرق تحليلية أخرى ذات صلة (على سبيل المثال، تحليل كروماتوغرافي سائل عالي الأداء (HPLC)، الرحلان الكهربي الشعري، التحليل الطيفي الكتلي، ازدواجية اللون الدائرية).
طرق تحليلية
| تحليل الأداء |
طرق |
| أكسدة الأحماض الأمينية |
LC-MS، كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء عكسي الطور (RP-HPLC) أو كروماتوغرافيا التفاعل الكاره للماء كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء (HIC-HPLC) وقياس الطيف الكتلي |
أجراءات تحليلية
1. تحضير العينة
2. إل سي-MS
3. تحليل البيانات
تكون بقايا التربتوفان (Trp) معرضة بشكل خاص للأكسدة بسبب التفاعل العالي للإندول العطري مع أنواع الأكسجين التفاعلية. تتطلب أكسدة Trp بعض التعرض لبقايا Trp المدفونة عادة في البنية ثلاثية الأبعاد للبروتين.
ومع ذلك، عندما تتأكسد بقايا Trp، فإنها يمكن أن تتحول إلى مجموعة متنوعة من المنتجات ذات خصائص مختلفة تمامًا عن Trp الأصلي. يتضمن المسار الأكثر شيوعًا لأكسدة Trp تكوين N-formylkinurenine (فرق الكتلة: +32).
حمض أميني آخر يتأكسد عادة هو الميثيونين. يمكن لذرة الكبريت الموجودة في بقايا Met قبول ذرة أكسجين واحدة أو اثنتين مما يؤدي إلى تكوين سلفوكسيد (فرق الكتلة: +16) أو سلفون (فرق الكتلة: +32)، على التوالي. يعد هذا التعديل شائعًا نسبيًا بسبب التعرض العالي لسطح Met.
AR
EN
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
لا
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
