إن إشغال موقع N-glycosylation هو سمة فسيولوجية للبروتينات السكرية وينتج بشكل أساسي N-glycan. يتم إجراء خدمة تحليل إشغال موقع N-glycosylation من Yaohai Bio-Pharma من خلال الهضم والإفراج والإثراء والتحليل باستخدام التحليل اللوني السائل والتأين بالرذاذ الكهربائي وقياس الطيف الكتلي وقياس الطيف الكتلي (LC-ESI-MS/MS).
لقد شاركنا في التوصيف الهيكلي للبروتين لمختلف الجزيئات الكبيرة، بما في ذلك لقاحات الوحدات الفرعية المؤتلفة، والأجسام النانوية/VHHs/الأجسام المضادة أحادية المجال (sdAbs)، وشظايا الأجسام المضادة، والهرمونات/الببتيدات، والسيتوكينات، وعوامل النمو (GF)، والإنزيمات، والكولاجينات، إلخ.
المتطلبات التنظيمية لشغل موقع N-glycosylation
وفقًا لتوجيهات ICH Q6B، "بالنسبة للبروتينات السكرية، يتم تحديد محتوى الكربوهيدرات (السكريات المحايدة والسكريات الأمينية وأحماض السياليك). علاوة على ذلك، يتم تحليل بنية سلاسل الكربوهيدرات، ونمط قليل السكاريد (المظهر الهوائي)، وموقع (مواقع) الارتباط بالجليكوزيل في سلسلة البولي ببتيد إلى أقصى حد ممكن.
المنهج التحليلي
| تحليل الأداء |
طرق |
| إشغال موقع N-glycosylation |
LC-MS بعد هضم الجليكوزيلاز والبروتياز |
الإجراءات
1. هضم البروتين للبروتينات لتوليد شظايا الببتيد الصغيرة.
2. إطلاق N-glycan باستخدام endoglycosidase H أو PNGase F. Endoglycosidase H يشق الرابطة بين بقايا GlcNAc في قلب الجليكانات المرتبطة بـ N، في حين أن PNGase F عبارة عن جليكوميداز يقطع الرابطة بين GlcNAc وAsn، ويحرر كامل الجسم. سلسلة السكر وتحويل Asn إلى Asp مع زيادة الكتلة بمقدار 1-Da.
3. إثراء N-glycopeptide عبر HILIC (التحليل اللوني السائل للتفاعل المحب للماء)
4. تحليل إشغال موقع الغليكوزيل المرتبط بـ N باستخدام LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
لا
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
