Кэпирование 5'-конца является существенной модификацией мРНК. мРНК с кэп-структурами, особенно со структурами Cap1, способствуют уклонению мРНК от врожденных иммунных ответов in vivo, что приводит к эффективной трансляции белков.
Ферментативное кэпирование (двухэтапный метод) — это традиционный метод кэпирования мРНК, аналогичный процессу кэпирования в эукариотических организмах. Под действием ряда ферментов 7-метилгуанин (m7G) связывается с 5'-концом мРНК через 5'-5'-трифосфатную связь и подвергается модификации метилирования с образованием кэп-структуры Cap 1 (m7GpppN).
Схема формирования структуры естественной шапки
Схема реакции ферментативного кэпирования следующая:
Линеаризованную плазмидную ДНК используют в качестве матрицы для транскрипции in vitro (IVT) в присутствии полимеразы Т7, а мРНК с 5'-концевой структурой образуется после одностадийной очистки с использованием кэп-фермента коровьей оспы и 2'-О. -метилтрансфераза.
Подробности об услугах
Дополнительная услуга | Сервис Подробнее | Срок доставки (день) |
Ферментативное кэпирование мРНК | Ферментативная реакция кэпирования | 1 |
Оптимизация реакции ограничения – необязательно | Проектирование и оптимизация реакционных компонентов | 3 ~ 7 |
Наши функции
- Проектирование и оптимизация компонента реакции кэпирования
Компонент реакции кэпирования оптимизируется, и производство транскрипта мРНК значительно увеличивается.
- Проверка экспрессии in vitro
Кэпированную мРНК трансфицируют в клетки 293Т, и можно обнаружить экспрессию целевого белка.
Благодаря строгому контролю экспериментальной среды и расходных материалов RNaseson эффективно предотвращается деградация мРНК.
Пример
Платформа мРНК Yaohai Bio-Pharma создала идеальный процесс реакции кэпирования.
Для мРНК eGFP, пре-продукта мРНК, полученного путем ферментативного кэпирования, сигнал флуоресценции eGFP (зеленая флуоресценция) на высоком уровне можно наблюдать после трансфекции клеток 293T в течение 24 часов, что обнаруживается с помощью вестерн-блоттинга (WB), демонстрируя, что Зеленый флуоресцентный белок, усиленный целевым белком (eGFP), можно эффективно экспрессировать in vitro.
Экспрессия мРНК eGFP с ферментативным блокированием в клетке 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕТ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
