По сравнению с двухэтапным ферментативным кэпированием одноэтапный метод котранскрипционного кэпирования может значительно сократить поток процесса. Метод ориентирован на результат и включает добавление кэп-аналогов к реакции транскрипции in vitro (IVT). Аналоги кэпа можно ввести в начале транскрипции, а мРНК с кэп-структурой можно получить после завершения транскрипции. Современные аналоги кэпа третьего поколения могут избежать обратного кэпирования и напрямую добавлять структуру Cap 1 к продукту транскрипции.
Из соображений иммуногенности и эффективности трансляции мРНК in vivo в процессе IVT часто используются определенные виды модифицированных NTP, а распространенными модифицированными нуклеотидами являются псевдоуридин (Ψ), N1-метилпсевдоуридин (N1Ψ) и 5-метилцитозин (5mC). .
Рисунок: Схема котранскрипционной и кэпирующей реакции мРНК.
Сервис Подробнее
Услуга | Сервис Подробнее | Срок доставки (рабочий день) |
Котранскрипционное кэпирование | Транскрипционный ответ in vitro (аналог Clean Cap) | 1-2 |
| Нуклеотидные модификации (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Удаление ДНК-матрицы (ДНаза I) |
Оптимизация состояния IVT – опционально | Проектирование и оптимизация реакционных компонентов | 3-7 |
Наши функции
- Разнообразные стратегии модификации нуклеотидов
Множественные необязательные стратегии модификации нуклеотидов могут улучшить экспрессию белка.
- Оптимизированная система реакции
Достичь высокого коэффициента транскрипции и высокой эффективности кэпирования.
- Стабильный процесс ограничения
Достичь уровня ограничения более 95%.
Эффективно предотвращайте деградацию мРНК путем строгого контроля содержания РНКазы в экспериментальной среде и расходных материалах.
Пример
Yaohai Bio-Pharma создала зрелую платформу процесса котранскрипционного кэпирования, используя аналоги «чистого кэпа» для прямого добавления структуры Cap1, избегая при этом обратного кэпирования. После стандартизированной предварительной обработки образцов и обнаружения капиллярным электрофорезом (КЭ) степень связывания мРНК усиленного зеленого флуоресцентного белка (eGFP) может достигать более 95%.
Эффективность кэпирования мРНК eGFP более 95%
мРНК eGFP и мРНК mCherry, полученные путем ко-транскрипционного кэпирования, трансфицируются в клетки 293T соответственно, и через 48 часов наблюдается сильный флуоресцентный сигнал, что позволяет предположить, что мРНК эффективно экспрессируется в клетках 293T.
Экспрессия мРНК eGFP и мРНК mCherry в клетке 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕТ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
