модификация 5'-конца является важным изменением mRNA. mRNA с кап-структурами, особенно Cap1, помогают мРНК избегать врожденных иммунных реакций in vivo, что приводит к эффективному переводу белка.
Энзиматическое закапывание (двухшаговый метод) является традиционным способом закапывания мРНК, аналогичным процессу закапывания в эукариотических организмах. Под действием серии ферментов 7-метилгуанин (m7G) связывается с 5'-концом мРНК через трифосфатную связь 5'-5' и проходит метилирование для образования кап-структуры Cap 1 (m7GpppN).
Схема формирования естественной кап-структуры
Процесс энзиматического закапывания выглядит следующим образом:
Линеаризованная плазмидная ДНК используется как шаблон для транскрипции in vitro (IVT) в присутствии полимеразы T7, и после одноступенчатой очистки с использованием ортопоксвирусной каппающей ферментной системы и 2'-O-метилтрансферазы образуется мРНК с кап-структурой на 5'-конце.
Детали услуг
Необязательные услуги |
Детали услуги |
Срок поставки (дни) |
энзиматическое закрытие mRNA |
Ферментативная реакция закрытия |
1 |
Оптимизация реакции закрытия - необязательно |
Проектирование и оптимизация компонентов реакции |
3~7 |
Наши особенности
- Проектирование и оптимизация компонента реакции закрытия
Компонент реакции закрытия оптимизирован, и производство транскрипта mRNA значительно увеличено.
- Верификация экспрессии in vitro
Закрытый mRNA трансфектируется в клетки 293T, и можно обнаружить экспрессию целевого белка.
С помощью строгого контроля РНКазы в экспериментальной среде и расходных материалах有效地 предотвращается деградация мРНК.
Изучение кейса
Платформа мРНК Yaohai Bio-Pharma разработала идеальный процесс реакции закрытия.
Для мРНК eGFP, предварительно обработанной ферментативным закапыванием, через 24 часа после трансфекции клеток 293T можно наблюдать интенсивный сигнал флуоресценции eGFP (зеленая флуоресценция), который определяется методом западного блотирования (WB), что демонстрирует эффективное выражение целевого белка — улучшенного зеленого флуоресцентного белка (eGFP) in vitro.
Выражение ферментативно закрытой мРНК eGFP в клетках 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
